[发明专利]一种免疫活性肽冻干粉及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于农产品精深加工及其副产物综合利用的技术领域，涉及一种免疫活性肽冻干粉及其制备方法，能够实现利用高压脉冲电场技术，在常温条件下，获得一种水分含量为1.2%～1.8%、蛋白质含量为72%～86%、分子量为10～30kDa的免疫活性肽冻干粉，经免疫活性评价实验证明，与对照组相比，受试组小鼠的脾淋巴细胞增殖能力显著提高10%～20%（P<0.01）。

背景技术

近年来，随着人们对各种免疫机理及调控途径的理解不断深入，免疫活性肽日趋成为生物活性肽领域的研究热点，其开发应用与深入研究具有重要意义。免疫活性肽是具备增强免疫功能和免疫刺激功能的一类生物活性肽，能够促进机体细胞移动，促进细胞吞噬功能，并起到抗肿瘤和抗菌作用。免疫活性肽包括内源肽和外源肽，当内源肽不足以提供机体免疫功能时，就需要有外源肽作为补充。据文献报道，研究者们已从牛乳、人乳和植物蛋白中获得了不同序列的免疫活性肽达三十余种，其中牛乳源活性肽是目前研究最多、最深入的免疫活性肽。国内对免疫活性肽的研究主要集中于天然肽的分离、纯化方面，而且对基因组合肽库和化学组合肽库的构建、筛选及应用已经开始起步。我国是农作物生产和消费大国，每年的玉米、大豆、小麦等农作物产量居世界前列，所以，研究开发从植物蛋白酶解物中获得免疫活性肽正日益引起重视。随着研究手段和方法的不断提高，免疫活性肽将更广泛地应用于婴幼儿食品、功能性食品和保健药品中，将对食品工业和畜牧产业的发展影响深远。

目前免疫活性肽的制备方法通常为热环境下的酶解法，其不易保持肽的活性稳定，而有关非热加工技术在免疫活性肽方面的研究尚未见报道。常见的酶解工艺需要借助高温使蛋白质变性和灭酶，整个酶解过程也在50—60℃的水浴条件下进行，虽然制备的活性肽水解度较好，肽得率高，但是活性不易稳定保持。在前期研究中，我们均采用热环境下的酶解技术制备获得玉米肽、大豆肽、小麦肽和禽蛋蛋清肽等生物活性肽，但因其制备方法繁复，条件温度高而常易出现产品的活性变质、功能性降低、异味生成等不良影响。为提高并保持肽的活性，需要结合实际操作，寻求非热或低温的技术方法。所以，本发明旨在利用高压脉冲电场（PEF）这一新兴非热加工技术来制备免疫活性肽冻干粉，以达到工艺流程时间缩短、能耗降低、产品性质稳定等目标。

非热加工技术是目前食品工业的开发热点，其中高压脉冲电场技术因具有较好的可行性、高效性和环保性，在食品和农畜产品加工中的应用前景广阔，而将其应用于酶解工艺实为首例。PEF是近年来研究最多的非热加工技术之一，相比热处理的作用特点，PEF的处理时间短，可以在几百或几十微秒内完成全部电能的释放，良好适应工业化生产；PEF通常选取室温或者低温的条件进行，对食品质量属性来说，能够减少食品感官和物理特性的有害变化；PEF的能耗低、效率高，能够减少在工业生产中的能源和资金消耗，环保优势较高。一些研究证实，PEF可以改变某些蛋白质的二级结构，作用结果为疏水基团和巯基的外露，引起蛋白的起泡性和乳化性的提高。另外，我们在前期研究中发现，PEF技术对部分多肽的活性有快速激活或抑制作用。然而，研究者对通过PEF来提高酶解效率，增强肽产品的功能性方面尚未探究。因此，本发明是在大量实验研究的基础上，利用高压脉冲电场的非热加工特性进行蛋白质的快速酶解，来制备一种免疫活性肽冻干粉。

免疫活性肽的功能评价方法有很多，淋巴细胞增殖和分化是机体免疫应答过程中的重要阶段，检测淋巴细胞增殖水平是细胞免疫研究的一种常用方法。根据《保健食品检验与评价技术规范实施手册》的功能学检验方法中所规定的增强免疫力功能检验方法，采用刀豆蛋白A（ConA）诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验的MTT法。实验原理为，体内T淋巴细胞受ConA刺激后出现母细胞的增殖反应，活细胞特别是增殖细胞中的线粒体水解酶可将MTh分解为兰紫色结晶，通过检测其光密度值能反映脾淋巴细胞的增殖情况，增殖情况越明显即受试小鼠的免疫功能越强。

发明内容

本专利需要解决的技术问题：