[发明专利]应用RPA技术检测CaMV 35S启动子和nos终止子有效
| 申请号： | 201310506260.1 | 申请日： | 2013-10-24 |
| 公开（公告）号： | CN103509875A | 公开（公告）日： | 2014-01-15 |
| 发明（设计）人： | 金芜军;宛煜嵩;徐潮;苗朝华;李亮;黄卫红 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京知本村知识产权代理事务所 11039 | 代理人： | 刘江良 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 应用 rpa 技术 检测 camv 35 启动子 nos 终止 | ||
1.一种用于通过重组酶聚合酶等温扩增技术鉴定植物中含有CaMV 35S启动子和/或nos终止子转基因成分的RPA引物和探针组合，其特征在于：鉴定含有P-35S转基因成分的正向引物序列如SEQ ID No.1所示，反向引物序列如SEQ ID No.2所示，探针序列如SEQ ID No.3所示；鉴定含有T-nos转基因成分的正向引物序列如SEQ ID No.4所示，反向引物序列如SEQ ID No.5所示，探针序列如SEQ ID No.6所示。
2.一种鉴定转基因植物中含有P-35S和/或T-nos转基因成分的试剂盒，其特征在于：该试剂盒包含权利要求1所述的引物和探针组合。
3.一种通过重组酶聚合酶等温扩增技术鉴定转基因植物中含有P-35S和/或T-nos转基因成分的方法，其特征在于：提取待测样品的DNA作为模板，利用权利要求1所述的引物及探针组合进行快速扩增及实时荧光检测，如果得到明显的扩增曲线，则证明所检样品含有P-35S或T-nos转基因成分。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：
向50μL扩增反应体系中加入浓度为10μmol/L正向引物及反向引物各2μL，浓度为10μmol/L探针0.5μL，模板DNA 50ng；
鉴定P-35S扩增程序为：RPA扩增检测仪或荧光定量PCR仪于39摄氏度反应15分钟；鉴定T-nos扩增程序为：RPA扩增检测仪或荧光定量PCR仪于39摄氏度反应25分钟。
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