[发明专利]IL-17A基因实时荧光PCR检测引物和试剂盒

说明书

 

技术领域

本发明涉及基因检测技术，尤其是涉及IL-17基因实时荧光PCR检测引物和试剂盒。

背景技术

白细胞激素-17（IL-17）是一种前炎症细胞因子，通过刺激靶细胞释放前炎症细胞因子及动员中性粒细胞因子发挥作用，诱导IL-6，一氧化氮和前列腺素产生，同上上调IL-1，TNF-a，和干扰素等炎症细胞因子的基因表，促进局部炎症的紧张和扩大，促进NO的合成，介导中性粒细胞和单核细胞聚集与炎症部位。

但是，目前发现IL-17A与多种炎症性及自身免疫性疾病相关，主要包括类风湿性关节炎（RA）和椎间盘退变等。IL-17A在RA的发生过程中起着关键作用，可导致血管新生、滑膜增生、软骨破坏及骨吸收增加。滑膜中的IL-17A的mRNA水平可以预测关节破坏的严重程度，损害程度，IL-17A是判断RA病情程度的重要指标之一。

目前IL-17A检测方法过于局限，目前只是针对骨膜进行直接抗体性检测，检测周期长，费用较高，病人的承受度也较低；本发明提供的IL-17A基因PCR检测方法，周期短，在病人进行血液生化检测时，同时完成IL-17A的检测。

发明内容

为了解决上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种IL-17A基因实时荧光PCR检测引物和试剂盒。

本发明所采用的技术方案如下：

IL-17A基因实时荧光PCR检测引物，序列如下：

正向引物(SEQ ID NO:1)：5-GTTAGGGTGCTTTAGGTCC-3；

反向引物(SEQ ID NO:2)：5-TAACAATGAGTTTCTGTACG-3。

IL-17A基因实时荧光PCR检测试剂盒，其包括

其包括一种混合试剂，所述的混合试剂包括：SYBR Premix Ex Taq II（2×）、、正向引物10μM、反向引物10μM。

所述的正向引物和反向引物为上述的引物。

IL-17A基因实时荧光PCR检测方法，具体步骤为：

 1）提取RNA，并反转录为cDNA；

     2）反应体系：取2μl 步骤1）制得的模板cDNA 溶液，加入上述试剂盒中的溶液12μl，再加入灭菌超纯水至总体积20μl ；将以上各组分加入至0.2mL 实时荧光PCR 反应管中，短暂离心；

3）实时荧光PCR 检测，具体反应提交如下：

94℃ /30s，1 次循环；95℃ /100s，66℃ /120s，40 次循环。

本发明采用SYBR Green I 实时荧光PCR 检测方法，对IL-17A基因进行鉴定，具有检测实时性和高效性，并可以对早期IL-17A基因表达进行检测，用于早期判断类风湿性关节炎，另外可以对病人进行个性诊断和治疗过程中， 1L-17A的基因表达情况的检测，并判断病人复发和加重病情的可能性。

附图说明

附图1为检测样品1-6实时荧光PCR检测曲线；

附图2为检测样品1-6和阴性对照对比图表。

具体实施方式

设计IL-17A基因实时荧光PCR检测引物，序列如下：

正向引物(SEQ ID NO:1)：5-GTTAGGGTGCTTTAGGTCC-3；

反向引物(SEQ ID NO:2)：5-TAACAATGAGTTTCTGTACG-3。

IL-17A基因实时荧光PCR检测试剂盒，其包括

其包括一种混合试剂，所述的混合试剂包括：SYBR Premix Ex Taq II（2×）、、正向引物10μM、反向引物10μM。

所述的正向引物和反向引物为上述的引物。

实施例1

1）提取5位类风湿性关节炎病人血清样品，标记为1-5，2位正常人血清作为阴性对照；分别提取各样品的RNA，并反转录为cDNA，低温保存备用。

2）取步骤1）中所述的取2μl 步骤1）制得的模板cDNA 溶液，加入上述试剂盒中的溶液12μl，再加入灭菌超纯水至总体积20μl ；将以上各组分加入至0.2mL 实时荧光PCR 反应管中，短暂离心；

3）实时荧光PCR 检测，具体反应提交如下：

94℃ /30s，1 次循环；95℃ /100s，66℃ /120s，40 次循环。

结果分析：

对得到实时荧光PCR检测的曲线进行分析；并对检测样品和阴性对照的荧光进行分析。