[发明专利]胶质细胞bFGF表达提高系统及其构建方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生长因子调控技术领域，特别是涉及一种胶质细胞bFGF表达提高系统及其构建方法和应用。

背景技术

胶质细胞是中枢神经系统中一类重要的细胞类型，胶质细胞的功能对于神经元正常代谢的运转，突触可塑性的维持和脑内微血管血流的控制都发挥重要作用。胶质细胞的重要功能同释放的神经递质和各类生长因子密切相关，胶质细胞可以分泌ATP,丝氨酸和谷氨酸等神经递质，同时还可以分泌bFGF,BDNF(脑相关生长因子)，NGF(神经生长因子)等生长因子。

碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）,是一种重要的生长因子，在细胞的生长、增殖和代谢维持中发挥重要作用。在中枢神经系统中，bFGF主要由胶质细胞合成和释放，对于神经元的正常发育和维持正常生理功能都发挥重要作用。bFGF合成和释放同多种神经精神系统疾病相关，以严重影响人类健康的帕金森氏病为例，黑质纹状体的多巴胺能神经元的功能受bFGF的精细调节，bFGF不仅能维持多巴胺能神经元在胚胎发育阶段的正常发育，还可以对多巴胺能神经元进行保护作用，提高bFGF的在体水平对于治疗帕金森氏病具有重要的预防和治疗意义。

传统的提高胶质细胞bFGF表达的方法多通过药物刺激胶质细胞的方法进行，通过激活胶质细胞上的多巴胺能受体和内部的分子通路来促使胶质细胞释放bFGF，但该方法特异性低，在影响胶质细胞的同时也会干预神经元或其他细胞。

发明内容

基于此，有必要提供一种特异性提高bFGF表达的胶质细胞bFGF表达提高系统及其构建方法和应用。

一种胶质细胞bFGF表达提高系统，包括：

用于感染胶质细胞的病毒载体，所述病毒载体中包括依次连接的ITR、启动子、光敏基因、绿色荧光标记基因和ITR；

病毒载体导入装置，用于所述病毒载体导入到所述胶质细胞中；

激光刺激装置，用于产生特定波长的光线并将所述特定波长的光线传送到所述胶质细胞。

在一个实施例中，所述启动子为CMV，所述光敏基因为ChETA，绿色荧光标记基因为eYFP。

在一个实施例中，所述病毒载体导入装置为注射器。

在一个实施例中，所述激光刺激装置包括激光发生器和光纤，所述激光发生器用于产生波长为470nm的蓝光，所述光纤用于将所述激光发生器产生的波长为470nm的蓝光传送到所述胶质细胞。

一种胶质细胞bFGF表达提高系统的构建方法，包括如下步骤：

将包括依次连接的ITR、启动子、光敏基因、绿色荧光标记基因和ITR的融合质粒以及与慢病毒包装相关的混合质粒pCMVΔR8.74和pMD2.G.一起，用脂质体一起转染至293FT细胞中，然后将所述293FT细胞传代培养后，破碎细胞膜、过柱，取上清液，所述上清液中含有用于感染胶质细胞的病毒载体，所述病毒载体中包括依次连接的ITR、启动子、光敏基因、绿色荧光标记基因和ITR；

提供用于所述病毒载体导入到所述胶质细胞中的病毒载体导入装置；

提供用于产生特定波长的光线并将所述特定波长的光线传送到所述胶质细胞的激光刺激装置。

在一个实施例中，所述启动子为CMV，所述光敏基因为ChETA，绿色荧光标记基因为eYFP。

在一个实施例中，所述病毒载体导入装置为注射器。

在一个实施例中，所述激光刺激装置包括激光发生器和光纤，所述激光发生器用于产生波长为470nm的蓝光，所述光纤用于将所述激光发生器产生的波长为470nm的蓝光传送到所述胶质细胞。

一种上述的胶质细胞bFGF表达提高系统在治疗帕金森症、癫痫、运动神经障碍、中风或抑郁症中的应用。

这种胶质细胞bFGF表达提高系统通过病毒载体刺激感染胶质细胞，接着通过激光刺激装置产生的特定波长的光线刺激感染了病毒载体的胶质细胞，从而特异性的刺激胶质细胞提高bFGF表达。这种胶质细胞bFGF表达提高系统用于提高胶质细胞的bFGF表达，相对于传统的提高胶质细胞bFGF表达的方法，特异性较高。

附图说明

图1为病毒载体感染离体小鼠胶质细胞48hr后的明场照片（BF）和荧光（FL）照片对比图；

图2为采用激光刺激装置对实施例1得到的胶质细胞进行蓝光刺激，得到的刺激电流和内向光电流的对比图；

图3为通过免疫荧光共定位的方法确定胶质细胞在体特异性表达光感基因得到的eYFP和ChETA的表达对比图；