[发明专利]胶质瘤细胞系及其构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及细胞生物学领域，特别是涉及一种胶质瘤细胞系及其构建方法。

背景技术

胶质瘤作为神经系统肿瘤来源于胶质细胞或未成熟的前体细胞，具有特殊的电生理学特性和膜通道性质，细胞膜离子通道的开放和关闭可以影响细胞的极化状态和兴奋性，进而影响细胞内的分子信号通路，从而在胶质瘤的存活，生长，转移中发挥重要作用。已有的研究也证实，癌症细胞的恶性增殖程度多涉及细胞自身兴奋性的改变；如肿瘤细胞自身膜电位的改变会影响肿瘤干细胞增殖和分化的效率。早期的研究表明电压依赖型钾离子通道可以调控神经细胞有丝分裂周期，采用钾离子通道阻断剂和去极化剂可以阻断钾离子通道从而有效抑制少突胶质细胞的增殖；另外，钙激活的瞬时受体电位通道（TRPC）通道也被证明在胶质瘤的生长特别是细胞周期中G2/M期的转变中发挥重要作用，通过抑制TRPC通道的活性，不仅抑制了胶质瘤细胞的体外增殖，同时还减少了皮下肿瘤和颅内肿瘤的体积，造成了瘤体积的缩小。

同正常胶质细胞相比，胶质瘤细胞表面缺乏正常胶质细胞表达的K4.1通道，这类内向整流型钾离子内流通道在胶质瘤表达的缺失导致细胞的生长失去控制，若将功能性K4.1通道转回胶质瘤细胞可以显著抑制胶质瘤细胞的生长。因此，通过影响胶质瘤细胞的兴奋性和调控细胞膜离子通道开放可以影响胞内的分子传导通路传导，进而可以达到抑制肿瘤生长的目的。

传统的影响胶质瘤细胞的兴奋性和调控细胞膜离子通道开放的方法，多通过离子通道的兴奋剂和抑制剂完成，然而，离子通道的兴奋剂和抑制剂多不具有组织特异性和胶质瘤细胞选择性，具有副作用大等缺点。因此，目前缺乏一种能够被选择性特异调控的胶质瘤细胞系。

发明内容

基于此，有必要提供一种能够被选择性特异调控的胶质瘤细胞系及其构建方法。

一种胶质瘤细胞系，所述胶质瘤细胞系为感染了病毒载体的胶质瘤细胞；

所述病毒载体中包括依次连接的ITR、启动子、光敏基因、绿色荧光标记基因和ITR。

在一个实施例中，所述启动子为c-fos，所述光敏基因为ChETA，绿色荧光标记基因为eYFP。

在一个实施例中，所述胶质瘤细胞为人胶质瘤细胞U87或人胶质瘤细胞H4。

一种胶质瘤细胞系的构建方法，包括如下步骤：

将包括依次连接的ITR、启动子、光敏基因、绿色荧光标记基因和ITR的融合质粒以及与病毒包装相关的混合质粒pCMVΔR8.74和pMD2.G.一起，用脂质体一起转染至293FT细胞中，然后将所述293FT细胞传代培养后，破碎细胞膜、过柱，取上清液，所述上清液中含有用于感染胶质细胞的病毒载体，所述病毒载体中包括依次连接的ITR、启动子、光敏基因、绿色荧光标记基因和ITR；

用所述病毒载体感染胶质瘤细胞，得到所述胶质瘤细胞系。

在一个实施例中，所述启动子为c-fos，所述光敏基因为ChETA，绿色荧光标记基因为eYFP。

在一个实施例中，所述胶质瘤细胞为人胶质瘤细胞U87或人胶质瘤细胞H4。

这种胶质瘤细胞系被光感基因特异性标记，可以在光的诱导刺激下可以产生稳定的光电流，从而可以通过光来对这种胶质瘤细胞系进行选择性特异调控。

附图说明

图1为病毒载体感染离体小鼠胶质细胞48hr后的明场照片（BF）和荧光（FL）照片对比图；

图2为采用激光刺激装置对实施例1得到的胶质细胞进行蓝光刺激，得到的刺激电流和内向光电流的对比图；

图3为采用蓝光持续刺激胶质瘤细胞1h，24h后对胶质瘤细胞的存活率进行分析得到的对照图；

图4a～图4e为蓝光照射肿瘤细胞后，引起胶质瘤细胞存活率下降，通过TUNEL染色得到的染色照片；其中，图4a为空白对照组不经过光照，图4b为空白对照组蓝光照射，图4c为绿色荧光标记基因表达组经过蓝光照射，图4d为光敏基因表达组不经过光照，图4e为光敏基因表达组经过蓝光照射。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。

一实施方式的胶质瘤细胞系，该胶质瘤细胞系为感染了病毒载体的胶质瘤细胞。