[发明专利]一种乙酰甲喹残留标示物脱二氧乙酰甲喹的半抗原和完全抗原及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫学领域，特别涉及一种乙酰甲喹残留标示物脱二氧乙酰甲喹（M₁）的半抗原和完全抗原及其制备方法。 

背景技术

乙酰甲喹（Mequindox，MEQ）又称痢菌净，属喹噁啉类化合物，是我国自行研制的具有自主知识产权的一类新兽药。由于具有广谱抗菌活性，在我国兽医临床上应用广泛。但是，生产实践表明，乙酰甲喹毒性偏大，剂量高于治疗量的3～5倍或长时间连续使用时可引起中毒甚至死亡。临床毒理学研究也提示其可引起基因突变、染色体畸变，具有肝脏毒性、肾上腺毒性和两代繁殖毒性。研究表明，乙酰甲喹在体内代谢迅速，在动物体内的半衰期不过十几个小时，通常不大可能检测出原药残留。因此，检测乙酰甲喹残留应以其代谢物作为标示物进行参考。目前，初步绘制的乙酰甲喹代谢图谱表明其在体内共有13种代谢物，初定脱二氧乙酰甲喹M₁（化学名：3-甲基-2-乙酰基喹噁啉）为残留标示物。 

国内外有关乙酰甲喹的残留检测方法的早期文献报道中大多是检测原药化合物，对其代谢物的定量检测目前只有液质联用法。该方法需要复杂昂贵的仪器，而且要经过繁琐的前处理，很难达到快速、简便的现场检测要求。基于抗原抗体反应的免疫学检测技术是小分子残留分析检测的一个新途径，该技术研究的关键是半抗原分子的设计、合成和完全抗原及抗体的制备。脱二氧乙酰甲喹结构简单，分子量（186）小，本身没有免疫原性，必须将其与大分子载体蛋白偶联制备出完全抗原，才能诱导动物产生抗体。因此，精心设计半抗原结构，选择合适的方法将半抗原偶联大分子载体，获得良好的完全抗原，就成为建立半抗原免疫检测的前提和关键。只有制备出高质量的完全抗原，才可能进一步制备检测所需抗体。目前，国内外有关乙酰甲喹残留标示物的免疫检测研究尚未见任何报道。 

发明内容

为克服现有技术的缺点和不足，本发明的首要目的在于提供一种乙酰甲喹残留标示物脱二氧乙酰甲喹（M₁）的半抗原。 

本发明的另一目的在于提供上述乙酰甲喹残留标示物脱二氧乙酰甲喹半抗原的制备方法。 

本发明的另一目的在于提供一种乙酰甲喹残留标示物脱二氧乙酰甲喹（M₁）的完全抗原。 

本发明的再一目的在于提供上述乙酰甲喹残留标示物脱二氧乙酰甲喹完全抗原的制备方法。 

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种乙酰甲喹残留标示物脱二氧乙酰甲喹（M₁）的半抗原，具有式I所示的结构式；式I所示的化合物为将脱二氧乙酰甲喹（M₁）进行结构改造后得到的化合物，既最大程度的保留了M₁的特征，又具有可以与载体蛋白偶联的活性基团，还提供了碳原子数为2～5个的连接臂； 

式Ⅰ； 

其中，R为碳链长度为C₁～C₄的亚甲基。 

本发明所述的乙酰甲喹残留标示物脱二氧乙酰甲喹半抗原的制备方法的反应方程式如图1所示。 

上述乙酰甲喹残留标示物脱二氧乙酰甲喹半抗原的制备方法，包括如下步骤： 

（1）在溶剂中，乙酰甲喹在催化剂作用下进行催化氢化反应，经萃取得3-甲基-2-乙酰基喹噁啉粗品； 

（2）在溶剂中，用步骤（1）制备的3-甲基-2-乙酰基喹噁啉粗品与氢氧化钠和盐酸羟胺进行羰基的还原胺化反应，经萃取得1-[3-(甲基)-2-喹噁啉]-乙酮肟； 

（3）在溶剂中，将步骤（2）制备的1-[3-(甲基)-2-喹噁啉]-乙酮肟在碱存在 下与卤代物发生烃化反应，经萃取得化合物a（如图1所示）； 

（4）在溶剂中，步骤（3）制备的化合物a在催化剂作用下发生水解反应生成化合物b（如图1所示），经萃取纯化后获得脱二氧乙酰甲喹半抗原。 

步骤（1）中所述溶剂优选为N,N-二甲基甲酰胺（DMF）； 

步骤（1）中所述催化剂为钯碳，所述乙酰甲喹和钯碳的质量比为(20:3)-(8:1)，优选14:1； 

步骤（1）中所述反应采用气球充氢气加压，室温下搅拌反应，反应时间为5～36h； 

步骤（1）中所述的萃取优选直接萃取，过滤钯碳后再萃取会造成损失，所述萃取所用的溶剂为乙酸乙酯，具体萃取操作步骤为：在步骤（1）的反应体系中加入水，用乙酸乙酯萃取两次并合并有机相，水洗两次，饱和氯化钠洗一次，无水硫酸钠干燥后过滤得滤液，旋蒸除去有机溶剂得到3-甲基-2-乙酰基喹噁啉粗品；