[发明专利]同时对多种核酸样本进行测序的方法

权利要求书

1.一种同时对多种核酸样本进行测序的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将多种核酸样本分别进行接头连接，以便获得连接接头的核酸样本，其中，针对不同的核酸样本采用不同的接头；

将所述连接接头的核酸样本分别进行第一PCR扩增，以便获得多种第一PCR扩增产物；

将所述多种第一PCR扩增产物分别进行末端磷酸化，以便获得多种经过末端磷酸化的PCR扩增产物；

针对每一种核酸样本，分别将所述经过末端磷酸化的PCR扩增产物进行DNA连接，以便获得多种DNA连接产物；

将所述多种DNA连接产物进行混合，以便获得混合DNA连接产物；

将所述混合DNA连接产物进行3’末端添加碱基A，以便获得3’末端添加碱基A的连接产物；

将所述3’末端添加碱基A的连接产物连接测序接头，以便获得测序接头连接产物；

将所述测序接头连接产物进行第二PCR扩增，以便获得第二PCR扩增产物，所述第二PCR扩增产物构成所述多种核酸样本的混合测序文库；

将所述混合测序文库进行测序，以便获得测序结果；以及

基于所述测序结果中与所述接头相对应的序列，对所述测序结果进行分类，以便分别获得所述多种核酸样本各自的核酸序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核酸样本来源于哺乳动物，优选人，更优选人的外周血，

任选地，所述核酸为DNA或RNA，

任选地，所述核酸为游离DNA。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在进行所述接头连接之前，进一步包括：

将所述多种核酸样本分别进行末端修复，

任选地，所述末端修复是利用Klenow片段、T4DNA聚合酶和T4多核苷酸激酶进行的，

任选地，利用T4DNA连接酶进行所述接头连接，

任选地，利用T4多核苷酸激酶进行所述末端磷酸化。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，利用PE接头和T4DNA连接酶进行所述DNA连接。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在获得多种DNA连接产物之后，以及将所述多种DNA连接产物进行混合之前，进一步包括对所述多种DNA连接产物进行片段选择，

任选地，通过切胶回收或磁珠捕获进行所述片段选择。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，利用Klenow(3’-5’exo-)进行所述3’端添加碱基A。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，通过二代测序平台进行所述测序，

任选地，通过选自Illumina的Hiseq、GA系列测序仪、Life tech的Ion系列测序仪和罗氏公司的454系列测序仪的至少一种进行所述测序，优选Illumina Miseq。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述测序接头连接产物的长度不大于测序仪的最长读长。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进一步包括：

对测序之前的各步骤的产物进行纯化回收，

任选地，通过磁珠法或PCR纯化试剂盒进行所述纯化回收。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，当核酸样本数多于接头数时，进一步包括：

将所述核酸样本进行分组，以便使各组的核酸样本数不大于接头数；以及

针对每一组核酸样本，分别进行各步骤。