[发明专利]多模板单分散三七活性皂苷分子印迹聚合物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种分子印迹聚合物的制备方法，尤其涉及一种多模板单分散三七活性皂苷分子印迹聚合物及其制备方法。

背景技术

三七为五加科植物三七(Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen)的干燥根及根茎，具有增强机体功能、增加冠脉血流量、扩张血管、降低心肌耗氧量、抑制血小板聚集、降低血粘度等作用，是我国传统的珍贵药材之一。三七的主要有效成分是三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁和人参皂苷Rb₁，其中人参皂苷Rg₁和人参皂苷Rb₁的含量较高。自古因其功效卓著颇受众多医家推崇，被誉为金疮杖疮之圣药，更是驰名中外“云南白药”的主要组成部分。自20世纪70年代以来，人们对三七单味药及其复方的化学成分、药理作用进行了大量的研究工作，然而由于三七所含成分复杂，且含量低，传统的分离方法如吸附树脂、活性炭等纯化三七活性皂苷，步骤繁多，操作繁琐，选择性差、分离效率低且重现性差，产品质量难以准确控制，严重影响了临床的用药安全，也是目前制约三七注射剂发展的瓶颈性问题。因此迫切需要一种高效分离三七活性皂苷的新方法。

分子印迹技术是模仿“抗原-抗体”识别原理发展的一种特异性识别目标分子的技术。它以欲识别的分子为模板，通过共价或非共价键的方式与特定的功能单体用交联剂结合生成聚合物，然后用特定的溶剂将模板分子洗脱，得到具有特异性识别位点的分子印迹聚合物（molecular imprinted polymers，MIPs），从而对模板分子及其结构类似物表现出高度的特异性识别性能。由于分子印迹技术操作简单，对目标分子的特异性识别能力强，近年来在越来越多的领域广泛应用，并取得良好效果。应用多模板分子印迹聚合物来分离纯化三七活性皂苷的研究，尚未见文献报道。

发明内容

解决的技术问题：本发明提供一种多模板单分散三七活性皂苷分子印迹聚合物及其制备方法，从而克服现有分离纯化技术的不足，使其能够简单、快速、特异性地吸附三七活性皂苷分子，实现对三七药材提取物中化学成分的选择性分离、高效富集。

技术方案：多模板单分散三七活性皂苷分子印迹聚合物，由以下步骤制得：

1)将模板分子、功能单体混合溶解在致孔剂中，超声混匀，静置2～4h，形成模板分子－功能单体复合物，再加入有效量的引发剂、交联剂，超声5～10min，通氮气5～10min，密封；其中，模板分子与功能单体的摩尔比为1:2～1:6，功能单体与交联剂的摩尔比为1:1～1:6；致孔剂的体积用量与模板分子的摩尔量之比为25～150ml/mmol；引发剂的用量是模板分子、功能单体和交联剂总质量的3%～5%；

2)在氮气保护下，分子印迹聚合物采用热引发，置于振荡培养箱中进行聚合反应，培养箱转速为100r/min～300r/min，聚合温度为50℃～70℃，聚合反应时间为20～36h；

3)聚合反应结束后，所得到的分子印迹聚合物用甲醇-冰醋酸进行洗脱，除去模板分子，再用甲醇洗至中性，然后45℃真空干燥12～24h，得到多模板单分散三七活性皂苷分子印迹聚合物。

多模板单分散三七活性皂苷分子印迹聚合物的制备方法，制备步骤为：

1)将模板分子、功能单体混合溶解在致孔剂中，超声混匀，静置2～4h，形成模板分子－功能单体复合物，再加入有效量的引发剂、交联剂，超声5～10min，通氮气5～10min，密封；其中，模板分子与功能单体的摩尔比为1:2～1:6，功能单体与交联剂的摩尔比为1:1～1:6；致孔剂的体积用量与模板分子的摩尔量之比为25～150ml/mmol；引发剂的用量是模板分子、功能单体和交联剂总质量的3%～5%；

2)在氮气保护下，分子印迹聚合物采用热引发，置于振荡培养箱中进行聚合反应，培养箱转速为100r/min～300r/min，聚合温度为50℃～70℃，聚合反应时间为20～36h；

3)聚合反应结束后，所得到的分子印迹聚合物用甲醇-冰醋酸进行洗脱，除去模板分子，再用甲醇洗至中性，然后45℃真空干燥12～24h，得到多模板单分散三七活性皂苷分子印迹聚合物。

所述的模板分子为人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rg₁和三七皂苷R₁，三者摩尔比为44:43:13。

所述的功能单体为丙烯酰胺、甲基丙烯酸、烯丙基脲或4-乙烯基吡啶。

所述的引发剂为偶氮二异丁腈或过氧化苯甲酰。