[发明专利]一种蜂花粉提取物及其制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及蜂花粉提取物的制备方法，，具体地说先提取蜂花粉的黄酮类化合物、再用提取残渣制备蜂花粉中的生物活性肽，再将黄酮类化合和活性肽混合制备成为蜂花粉提取物，所制备的蜂花粉提取物同时兼备活性肽和黄酮类化合物的活性。本发明属于生物化工、制药、食品等技术领域。

背景技术

蜂花粉是蜂蜜采集有花植物的花粉粒，在采集过程中加上蜂蜜自身的腺上分泌物、唾液和花蜜而形成。蜂花粉是蜂群生长和繁衍的主要营养来源之一，具有很高的营养价值。蜂花粉包含蛋白质、碳水化合物、黄酮类化合物、微量元素、酶等多种营养成分，因此蜂花粉素来就有“天然微型营养库”等美誉。关于蜂花粉的生物活性研究表明，蜂花粉具有改善心血管疾病、增强免疫力、降血糖、抗氧化、抗衰老、抑制前列腺疾病等功效。

文献1（中国专利CN200810007853.2）公开用不同有机溶剂提取油菜蜂花粉的有效部位，有效部位在预防酒精性肝损伤的新用途。文献2(中国专利200610052876.6)公开了用酒精提取破壁蜂花粉活性组分，该活性组分具有降血脂的功能。文献3（中国专利200810134816.8）公开了提取蜂花粉蛋白质并用酶解法制备肽，蜂花粉肽具有血管紧张素转移酶抑制。文献4（中国专利201010295791.7）公开了从油菜蜂花粉中得到了一种具有抗炎、镇痛、抑菌活性的提取物的方法。文献5（中国专利201010169477.4）公开了一种从蜂花粉中提取油脂类化合物的方法。文献6（中国专利201110364321.6）公开了一种从蜂花粉中提取辅酶Q10的方法。文献7（中国专利200410073514.6）公开了从油菜花粉中制备具有治疗前列腺肿瘤的有效部位的方法。尽管目前关于蜂花粉活性组分提取的方法已有很多，但是现有方法都是以蜂花粉中某种单一物质为目标产物。虽然提取得到的组分具有较好的活性，但是却在提取过程中损失了蜂花粉中其他的活性成分，使蜂花粉仅仅成为某种成分的原料，而无法体现蜂花粉“全能营养库”的特点。未经加工的蜂花粉作为功能性食品或者药物时使用时要达到理想的功效所需剂量较大。

发明内容

目前蜂花粉存在原药直接使用所需剂量大、提取物活性成分单一无法体现蜂花粉全效的问题，至今为止还未见有关蜂花粉保留全效的制备方法。本发明人经过研究发现蜂花粉中的主要生物活性成分为黄酮类化合物以及肽类化合物，提出一种全新的蜂花粉提取物制备方法，该技术浓缩黄酮类化合物、精制蜂花粉肽化合物，利用该技术制备的蜂花粉提取物最大程度地保留了蜂花粉的生物活性，同时又大大降低了蜂花粉的有效剂量。

本发明的目的是提供一种蜂花粉提取物的制备方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

选用干燥的蜂花粉，首先用溶剂提取花粉中的黄酮类化合物，再将提取剩余的残渣用蛋白水解酶酶解制备蜂花粉活性肽，然后将黄酮类化合物和活性肽合并，成为蜂花粉提取物。

蜂花粉提取物按照以下方法制备：干燥的蜂花粉按照原料:溶剂=1kg:5～50L的比例加入溶剂，20-70℃提取1～10小时，提取结束后过滤或离心将提取液与固形物分离分别进行处理：

（1）提取液的处理方法：提取液经真空浓缩，浓缩样品用体积浓度40-70%乙醇溶解后上大孔树脂柱，先用2～10倍柱体积的去离子水淋洗，然后再用体积浓度40～90%乙醇洗柱子并收集流分，将含乙醇洗脱剂洗脱的流分真空浓缩得到组分1。

（2）固形物处理方法：按照原料：溶液=1kg：2～10L的比例加入水或者缓冲液混合，pH调整混合液在范围2～10，再加入原料质量的0.001～3%的蛋白水解酶，于20～60℃酶解1～48小时；酶解结束后将反应体系温度升至80-100℃保持10-60分钟，使酶失活，然后离心或过滤，收集滤液浓缩干燥得到组分2。

将组分1与组分2再次混合，得到蜂花粉提取物。

本发明干燥花粉提取所用的溶剂为：水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、环己烷、正己烷、石油醚中的一种或二种以上的溶剂混合物

本发明固形物酶解中所用的蛋白水解酶为：蛋白水解酶为胃蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶或中性蛋白酶中的一种或二种以上。

本发明所述缓冲液为：磷酸缓冲液、Tris-HCI缓冲液、醋酸缓冲液、去离子水中的一种。