[发明专利]雄烯二酮生产配方的优化

说明书

技术领域

本发明涉及一种雄烯二酮生产配方的优化工艺，属于发酵技术领域。

背景技术

雄烯二酮是从精巢或尿中提取出的具有雄性激素作用的一种甾类化合物，单纯的依靠化学方法生产雄烯二酮远远达不到市场的需求。通过微生物选择性降解甾醇侧链，可得到制备甾体激素类药物的重要中间体雄烯二酮(雄甾-4- 烯-3,17- 二酮，androst-4-ene-3,17-dione，简称 AD)。因此采用微生物发酵生产AD具有产品纯度高、生产成本低、周期短等特点，是当前雄烯二酮生产的一大趋势。

但目前雄烯二酮发酵生产中还存在一定的弊端，发酵过程中产生的泡沫多，成本高，提取工艺困难等。

发明内容

本发明的目的是提供一种发酵过程中产生的泡沫少，成本低，能够有效地降低发酵染菌率，易于提取的雄烯二酮发酵新配方。

  本发明的内容与要点分述如下

一．根据更适宜发酵生产的原则进行优化

优化后的种子配方为(g/L)：丙三醇2.5，氯化铵2.5，磷酸二氢钾0.08，七水硫酸镁0.1，酵母粉20，pH值7.0；

优化后的发酵配方为(g/L)：丙三醇25，黄豆饼粉45，硫酸铵4，七水硫酸镁3，磷酸氢二钾2，酵母粉3，氯化锰0.004，碳酸钙15，植物甾醇30，卵磷脂3，pH值7.0。

二．培养工艺与原工艺基本相同

（1）摇瓶工艺

种子瓶培养条件为：转速200r/min，培养48±6h，培养温度为30±1℃，湿度30%-60%。发酵瓶培养条件为：转速220r/min，培养 5-7d，培养温度为30±1℃，湿度30%-60%。

与原工艺不同点：在发酵瓶培养48h后，每隔24h补加甘油和硫酸铵溶液：35%甘油溶液，20%硫酸铵溶液，单独灭菌后，取4ml20%硫酸铵溶液加入到50ml35%甘油溶液中，混合均匀，从48h后，每隔24h补加1.5ml上述混合溶液。

（2）罐上工艺

种子罐工艺：温度30±1℃，罐压0.05-0.07MPa，搅拌转速130-150rpm，空气流量1:1，培养周期24h。

移种条件：pH值升至7.5以上，无菌正常，菌体量大，菌体染色较深，粗壮可移入发酵罐，接种量10%。

发酵瓶培养工艺为：温度30±1℃，罐压0.05-0.07MPa，搅拌转速根据溶氧情况调节，溶氧＞30%，空气流量1:1，转速：150-260rpm，

pH值用10%浓度氨水溶液控制在6.6-7.0，培养过程中补加甘油控制在5-10g/L。

培养周期为160-170小时，放罐。

与原工艺不同点：优化后的配方需要在发酵罐培养过程中补加甘油，将甘油控制在5-10g/L。

本发明的优点和效果是：

1.丙三醇为液体碳源，更有利于菌体吸收利用。

2.丙三醇是油性物质，能够有效的减少发酵过程中产生的泡沫。

3.卵磷脂对甾醇的助溶效果优于吐温-80。

4.卵磷脂能够组成细胞膜，使细胞活化，能够促进菌体对甾醇的转化。      5. 树脂的去除，有利于后期提取，降低生产成本。

具体实施方式

下面通过50L罐实验例子对本发明做进一步说明，下述实例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实例来限定本发明的保护范围。

一．种子制备：

将成熟斜面接种到一级种子瓶中，装量为100ml/500ml，30±1℃，湿度30%-60%培养48±6h，菌体量大，pH值达到7.5左右，接种到二级种子瓶中，装量为200ml/1000ml，30±1℃，湿度30%-60%培养48±6h，菌体量大，pH值达到7.5左右，接种到5L种子罐中。

二.种子罐培养：

种子罐培养工艺为：温度30±1℃，罐压0.05-0.07MPa，搅拌转速130-150rpm，空气流量1:1，培养周期24h。

移种条件：pH值升至7.5以上，无菌正常，菌体量大，菌体染色较深，粗壮可移入发酵罐，接种量10%。

三．发酵培养：

发酵瓶培养工艺为：温度30±1℃，罐压0.05-0.07MPa，搅拌转速根据溶氧情况调节，溶氧＞30%，空气流量1:1，转速：150-260rpm，

pH值用10%浓度氨水溶液控制在6.6-7.0，培养过程中补加甘油控制在5-10g/L。

培养周期为160-170小时，放罐。