[发明专利]一种用于防治枯萎病的芽孢杆菌菌剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种芽孢杆菌菌剂，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的芽孢杆菌菌剂，其特征在于，由如下组分组成：

3.权利要求1或2所述芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1).斜面培养：将枯草芽孢杆菌A-2、枯草芽孢杆菌F-5、解淀粉芽孢杆菌ZR-1、解淀粉芽孢杆菌ZR-8四种原始菌种在无菌条件下分别接种于固体培养基上，20℃-37℃条件下，培养1-3天，使菌种活化；

2).一级种子培养：将步骤1)活化的菌种在无菌条件下分别接种于液体培养基，20℃-37℃条件下，100-200r/min摇床培养2-3天，单菌种液体培养OD₆₀₀值达到2.0-4.0之间时停止培养，制得一级种子；

3).二级种子培养：按液体培养基的体积比为5-20%的接种量，将一级种子分别接种于发酵罐中，20℃-37℃条件下，搅拌速度为100-200r/min，通气量为1：0.5-1.5，培养2-3天，制得二级种子；

4).混合发酵培养：按液体培养基的体积比为5-20%的接种量，将二级种子接种于发酵罐中，进行高密度发酵培养，获得芽孢杆菌菌剂。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤1)中，所述固体培养基为牛肉膏蛋白胨培养基；

在步骤2）、步骤3）中，所述液体培养基为牛肉膏蛋白琼脂胨培养基。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤2）中，所述OD₆₀₀值为2.0-2.5；

在步骤3）中，通气量为1：0.6-1.0。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤4）中，所述液体培养基的配方按质量百分比为：糖蜜5-10%、豆饼粉2-10%、蛋白胨1.0-5%、磷酸氢二钾1-1.5‰，余量为水。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤4）中，所述高密度发酵培养采用补料分批培养方式。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述补料分批培养方式中补料碳源为：葡萄糖、蔗糖、糖蜜中的一种或两种以上；氮源为：豆饼粉和/或蛋白胨。

9.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤4）中，所述混合发酵培养为有氧培养：起始0-24小时内，间隔通气，保持在有氧条件下发酵，通气量1：1-1.5，调控发酵溶解氧10-15%，搅拌转速100-200r/min，搅拌间隔时间2-3小时，搅拌1-3分钟，温度25-35℃。

10.权利要求1或2所述芽孢杆菌菌剂作为生防制剂在防治植物枯萎病中的应用。