[发明专利]尼日利亚菌素的制备方法有效

申请号：	201310486479.X	申请日：	2011-03-21
公开（公告）号：	CN103497980A	公开（公告）日：	2014-01-08
发明（设计）人：	郑天凌;郑小伟;张帮周;黄丽萍;张金龙	申请（专利权）人：	厦门大学
主分类号：	C12P17/18	分类号：	C12P17/18;C12R1/465
代理公司：	厦门南强之路专利事务所(普通合伙) 35200	代理人：	马应森
地址：	361005 ***	国省代码：	福建;35
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摘要：
搜索关键词：	尼日利亚菌素制备方法
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【权利要求书】：

1.尼日利亚菌素的制备方法，其特征在于所述尼日利亚菌素的分子式为C₄₀H₆₈O₁₁，相对分子质量为742，结构式为：

所述制备方法包括以下步骤：

1）将生产尼日利亚菌素的菌株接种于平板上划线分离，于28～37℃温度下培养5～7d；挑取单菌落接种于高氏一号液体培养基中，于28～37℃，180～250rpm培养5～7d后即得发酵液；将所得发酵液进行离心，收集上清液；所述生产尼日利亚菌素的菌株为Streptomyces malaysiensis O4-6，该菌株已于2011年2月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏中心保藏编号为CCTCC NO：M2011051；

2）用乙酸乙酯萃取步骤1）所得上清液，减压浓缩，干燥，得乙酸乙酯萃取物；

3）将乙酸乙酯萃取物溶于乙酸乙酯，再加入到硅胶柱中进行洗脱，收集洗脱液进行薄层层析分析，根据展开图谱，合并收集的洗脱液；

4）将步骤3）所得洗脱液于30～45℃下真空蒸干，产物进行抑藻活性的测定，获得可抑藻的活性组分；

5）将所得可抑藻的活性组分进行高效液相色谱洗脱，收集洗脱液，获得尼日利亚菌素。

2.如权利要求1所述尼日利亚菌素的制备方法，其特征在于在步骤1）中，所述离心的条件为：速率10000～12000g，时间10～20min。

3.如权利要求1所述尼日利亚菌素的制备方法，其特征在于在步骤3）中，所述硅胶柱的规格为170mm×30mm，200～300目。

4.如权利要求1所述尼日利亚菌素的制备方法，其特征在于在步骤3）中，所述洗脱的洗脱剂为正己烷和乙酸乙酯的混合物，所述洗脱的程序为：用正己烷和乙酸乙酯体积比1∶2的混合物洗脱20min，再用正己烷和乙酸乙酯体积比1∶1的混合物洗脱30min，最后用正己烷洗脱30min，洗脱的流速为：1mL/min。

5.如权利要求1所述尼日利亚菌素的制备方法，其特征在于在步骤3）中，所述薄层层析的展开剂为乙酸乙酯，所述薄层层析的显示剂为含0.5%碘的氯仿溶液。

6.如权利要求1所述尼日利亚菌素的制备方法，其特征在于在步骤5）中，所述洗脱的程序：

0～7.5min 85%甲醇/水；

7.5～10.5min 85%甲醇/水～100%甲醇；

10.5～22.5min 100%甲醇。