[发明专利]一种量子点标记的蛋白质芯片试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学检测技术领域，尤其涉及一种量子点标记的蛋白质芯片试剂盒及其制备方法。

背景技术

蛋白质芯片技术概念起源于20世纪80年代后期，是生命科学领域热门的新技术之一。蛋白质芯片具有平行性、高通量、灵敏度高、样品用量少、检测速度快等优点。然而，由于蛋白质的化学成分和结构复杂多变，固定在芯片表面的蛋白质容易变性失活。因此，寻找合适的载体和表面修饰方法以保证固定足够量的蛋白质并保持其天然活性成为研制蛋白质微阵列的关键步骤之一。

近年来经过科研人员的尝试和研发，逐步形成了以滤膜、塑料、玻片和金属膜等为主的固相载体。在这几类载体中，玻片具有廉价、表面光滑、荧光背景低、性能稳定、抗体用量低等优点。但是，用玻片固定蛋白往往具有样品易蒸发、不适合多步反应、容量较小和容易发生交叉污染等缺点。

另外，在制作蛋白质芯片的过程中，采用传统的有机染料作为检测标记物，往往带来灵敏度低，稳定性差，检测器材条件要求较高等缺点。量子点作为一种新型的无机荧光标记物，具有激发范围广、发射范围窄、灵敏度高、稳定性好、便于检测等优点。因而，通过改进蛋白质在玻片上的固定方式，以及结合量子点标记物，将充分发挥以玻片作为基片的蛋白质芯片的优势。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供一种以玻片为载体，且灵敏度高、稳定性高、样品不易蒸发和反应容量大的量子点标记的蛋白质芯片试剂盒及量子点标记的蛋白质芯片试剂盒的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种量子点标记的蛋白质芯片试剂盒，包括设有若干点阵分布的点样孔的固相载体和检测剂，所述固相载体固定有阴性对照标志物、阳性对照标志物和若干种能与炎症因子特异性结合的固相抗体，所述固相载体由玻片，以及玻片上由下至上依次设置的氨基修饰层、醛基修饰层和琼脂糖修饰层组成；所述阴性对照标志物和阳性对照标志物分别固定于不同的点样孔中，所述每种固相抗体分别固定于不同点样孔中形成若干独立识别位点；所述检测剂由与每种固相抗体相对应的量子点标记抗体组成，所述相对应的固相抗体与量子点标记抗体是能与同种炎症因子特异性结合且具有不同抗原结合位点的抗体。

所述固相载体呈方形，所述固相载体四角的点样孔处均分别固定有阴性对照标志物和阳性对照标志物。

所述阴性对照标志物、阳性对照标志物和每种固相抗体均重复5次点样于不同的点样孔中。

所述炎症因子识别位点、阳性对照点和阴性对照点的体积均为1mm³，所述炎症因子识别区中相邻两个炎症因子识别位点的距离为1.5mm；所述阴性质控区中相邻两个阴性对照点的距离为1.5mm；所述阳性质控区中相邻两个阳性对照点的距离为1.5mm。

所述阴性对照标志物为BSA，所述阳性对照标志物为能与检测剂特异性结合的二抗。

所述固相抗体为CRP抗体Ⅰ、Myoglobin抗体Ⅰ、cTnT抗体Ⅰ、NT-proBNP抗体Ⅰ、CK-MB抗体Ⅰ、H-FABP抗体Ⅰ、GPBB抗体Ⅰ和D-Dimer抗体Ⅰ。

所述检测剂为量子点标记的CRP抗体Ⅱ、Myoglobin抗体Ⅱ、cTnT抗体Ⅱ、NT-proBNP抗体Ⅱ、CK-MB抗体Ⅱ、H-FABP抗体Ⅱ、GPBB抗体Ⅱ和D-Dimer抗体Ⅱ。

以上所述量子点标记的蛋白质芯片试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

a、氨基修饰：将用水清洗后的具有蚀刻孔的玻片浸泡于25-30%的氨水中8-12h，接着用去离子水冲洗玻片并将其浸于丙酮中5-8min；取出玻片并自然晾干至玻片表面无液膜后，将玻片置于含4%的3-氨基丙基三乙氧基硅烷的水含量为10%的丙酮溶液中反应20-30min，反应结束后用丙酮清洗玻片，然后将玻片置于80-100℃下干燥1-2h，形成氨基修饰层；

b、醛基修饰：室温下，将氨基修饰后的玻片置于含5-8%戊二醛的pH=7.2-7.6，浓度为0.01mol/L的PBS中浸泡2-4h；接着用pH=7.2-7.6，浓度为0.01mol/L的PBS清洗玻片上的戊二醛；然后用N₂吹干至玻片表面无液膜形成醛基修饰层，干燥保存；