[发明专利]检测梅毒螺旋体的方法及量子点标记免疫层析试纸及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学免疫检测方法，特别是涉及使用量子点标记免疫层析试纸，以免疫学的方法检测梅毒螺旋体的方法。

背景技术

梅毒螺旋体（TreponemaPallidun）是梅毒的病原体，因其透明，不易着色，故又称苍白螺旋体。梅毒是一种广泛流行的性病，在中国发病率又有所回升。梅毒螺旋体只感染人类，分获得性梅毒与胎传梅毒。获得性梅毒主要通过性接触传染；胎传梅毒由梅毒螺旋体通过胎盘，从脐带血循环传给胎儿，可引起胎儿全身感染。螺旋体在胎儿内脏及组织中大量繁殖，可引起胎儿死亡或流产。

目前，梅毒血清学检测方法常用的包括快速血浆反应素环状卡片实验（RPR），甲苯胺红不加热血清试验（TRUST），梅毒螺旋体明胶凝集实验（TPPA），胶体金法等。RPR、TRUST检查的是梅毒螺旋体特异性，灵敏度和特异性都较差（假阳性和假阴性高达30%）；胶体金法虽然检测快速简便，容易操作，但是准确率较低，灵敏度也较低；而TPPA虽然灵敏度和特异性较高，但是所使用的天然螺旋体抗原来源困难，价格昂贵，操作复杂，判断结果受主观影响因素较大，比较难以实现自动化。因此寻求一种价格便宜、操作简便、灵敏度和特异性都较高的检测方法是迫切需要解决的问题。

发明内容

针对上述技术的不足之处，本发明提供一种价格便宜、操作简便、灵敏度和特异性都较高的检测试纸以及用该试纸检测梅毒螺旋体的方法。

一种量子点标记免疫层析试纸，设有塑料板、硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜A、量子点标记梅毒螺旋体单克隆抗体的玻璃纤维素膜B、吸水纸；

其中，所述塑料板上依次粘贴有玻璃纤维素膜A、量子点标记梅毒螺旋体单克隆抗体的玻璃纤维素膜B、硝酸纤维素膜、吸水纸；

其中，所述硝酸纤维素膜一端有梅毒螺旋体多克隆抗体和兔抗鼠二抗，以此形成检测带T和质控带C；

其中，所述量子点标记的梅毒螺旋体单克隆抗体位于玻璃纤维素膜B的一端，与检测带T和质控带C相对应，并且量子点标记的梅毒螺旋体单克隆抗体位于进样点一端。

优选的，所述量子点为CdTe/ZnSe核壳量子点。

优选的，所述塑料板为粘性PVC底板。

优选的，所述梅毒螺旋体多克隆抗体的浓度为0.5g/L。

优选的，所述兔抗鼠二抗的浓度为1.0g/L。

优选的，所述检测带T和质控带C间距不少于5mm。

如上所述的试纸的制备方法，包括如下步骤：

（1）量子点与梅毒螺旋体单克隆抗体的偶联：

取0.01M的PBS缓冲液100～200uL与5～20uL表面连有羧基的量子点；

选取偶联试剂，偶联试剂选自羟基硫代琥珀酸亚胺、1-（3-二甲基氨丙基）-3乙基碳二胺盐酸盐；

加入梅毒螺旋体单克隆抗体150～200uL；

摇床反应1～4小时；

层析柱过滤，离心纯化；

用1%～5%的牛血清白蛋白封闭；

4℃保存；

（2）试纸的制备：

用0.05～0.15M的PBS缓冲液稀释梅毒螺旋体多克隆抗体及兔抗鼠二抗，将0.5g/L梅毒螺旋体多克隆抗体和1.0g/L兔抗鼠二抗喷在硝酸纤维素膜一端，形成检测带T和质控带C，T带和C带间隔5mm,室温晾干，将硝酸纤维素膜放入PBS缓冲液中，37℃封闭待用，或者干燥后4℃保存；

将量子点标记梅毒螺旋体单克隆抗体均匀喷覆于玻璃纤维膜B一端，与形成的T带和C带相对应，室温干燥，4℃保存；

在塑料板上依次粘帖玻璃纤维素膜A、量子点标记梅毒螺旋体单克隆抗体的玻璃纤维素膜B、硝酸纤维素膜、吸水纸；

用试纸切刀切割成试纸，干燥后密封保存。

用所述的试纸检测梅毒螺旋体，包括如下步骤：将样品点样在组装好的试纸上接近梅毒螺旋体单克隆抗体的一端，反应5min后，在紫外分析仪中观察结果。