[发明专利]一种海藻酸－透明质酸原位组织工程细胞支架及其制备方法

权利要求书

1.一种海藻酸－透明质酸原位组织工程细胞支架的制备方法，包括以下步骤：

用生理盐水或生理缓冲液分别将海藻酸或其衍生物和透明质酸或其衍生物配成溶液，得到含海藻酸或其衍生物的溶液和含透明质酸或其衍生物的溶液，将上述两种溶液与所需载负的细胞混合后，室温平衡一段时间后即得海藻酸－透明质酸原位组织工程细胞支架。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述含海藻酸或其衍生物的溶液中，海藻酸或其衍生物的质量体积百分浓度为0.5－5.0％；优选的，质量体积百分浓度为1.5－5.0％；再优选的，质量体积百分浓度为3.0－5.0％；最优选的，质量体积百分浓度为3.0％、4.0％或5.0％；

所述含透明质酸或其衍生物的溶液中，透明质酸或其衍生物的质量体积百分浓度为0.5－5.0％；优选的，质量体积百分浓度为1.5－3.5％；再优选的，质量体积百分浓度为2－3.5％；最优选的，质量体积百分浓度为3.5％、2.5%或2.0%。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述含海藻酸或其衍生物的溶液与所述含透明质酸或其衍生物的溶液的体积比为1：4—4：1；优选的，体积比为1：3—3：1；再优选的，体积比为1：3—2：1；最优选的，体积比为1：3、1:2或2：1。

4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：

所述海藻酸或其衍生物重均分子量为5－25万Da；优选的，重均分子量为12－15万Da；最优选的，重均分子量为15KD或12KD；

所述透明质酸或其衍生物重均分子量为100－300万Da；优选的，重均分子量为150－250万Da；最优选的，重均分子量为200万Da。

5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：

所述海藻酸或其衍生物包括海藻酸钠、海藻酸钾、海藻酸铵、海藻酸钙或氧化醛基化海藻酸钠中的任意一种物质或两种以上物质的任意组合；

所述透明质酸或其衍生物包括透明质酸钠、氧化醛基化透明质酸钠或硫化透明质酸钠中的任意一种物质或两种以上物质的任意组合。

6.权利要求1-6任一所述方法制备得到的海藻酸－透明质酸原位组织工程细胞支架。

7.海藻酸或其衍生物，和透明质酸或其衍生物在制备原位组织工程细胞支架中的应用；

或，海藻酸或其衍生物，和透明质酸或其衍生物作为支架材料在制备原位组织工程中细胞支架中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：

所述海藻酸或其衍生物包括海藻酸钠、海藻酸钾、海藻酸铵、海藻酸钙或氧化醛基化海藻酸钠中的任意一种物质或两种以上物质的任意组合；

所述透明质酸或其衍生物包括透明质酸钠、氧化醛基化透明质酸钠或硫化透明质酸中的任意一种物质或两种以上物质的任意组合。

9.用于制备原位组织工程中细胞支架的材料，包含海藻酸或其衍生物，和透明质酸或其衍生物。

10.根据权利要求9所述的材料，其特征在于：

所述材料还包括说明书，所述说明书中记载有如下内容：

使用前，用生理盐水或生理缓冲液分别将海藻酸或其衍生物和透明质酸或其衍生物配成溶液，得到含海藻酸或其衍生物的溶液和含透明质酸或其衍生物的溶液，将上述两种溶液与所需载负的细胞混合后，室温平衡一段时间后即得海藻酸－透明质酸原位组织工程细胞支架；

所述含海藻酸或其衍生物的溶液中，海藻酸或其衍生物的质量体积百分浓度为0.5－5.0％；优选的，质量体积百分浓度为1.5－5.0％；再优选的，质量体积百分浓度为3.0－5.0％；最优选的，质量体积百分浓度为3.0％、4.0％或5.0％；

所述含透明质酸或其衍生物的溶液中，透明质酸或其衍生物的质量体积百分浓度为0.5－5.0％；优选的，质量体积百分浓度为1.5－3.5％；再优选的，质量体积百分浓度为2－3.5％；最优选的，质量体积百分浓度为3.5％、2.5%或2.0%；

所述生理盐水或生理缓冲液为无菌无热原的生理盐水或生理缓冲液；

所述所需载负的细胞包括生物体所有组织的细胞；优选软组织细胞；再优选软骨组织的细胞；最优选成骨细胞MC3T3-E1或心肌细胞H9C2；

所述混合的具体过程为：将上述两种溶液中的任意一种与所需载负的细胞，灌装入注射器中；将剩下的另外一种溶液灌装入另外一只注射器中；将上述两种溶液通过三通注射器混合；

所述含海藻酸或其衍生物的溶液与所述含透明质酸或其衍生物的溶液的体积比为1：4—4：1；优选的，体积比为1：3—3：1；再优选的，体积比为1：3—2：1；最优选的，体积比为1：3、1:2或2：1；

所述室温平衡的时间为1－50min；优选的，室温平衡的时间为1-20min；再优选的，室温平衡的时间为3-5min；最优选的，室温平衡的时间为3min、4min或5min。