[发明专利]一种鸡油菌菌丝多糖的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及真菌多糖技术领域，尤其涉及一种鸡油菌菌丝多糖的提取方法。 

背景技术

真菌多糖是一类具有广泛的药理活性和保健作用的高分子聚合物，具有抗肿瘤、抗感染、抗凝血、抗病毒、降血糖、降血脂、修复损伤组织细胞等多种生理功能。常见的真菌多糖有香菇多糖、黑木耳多糖、猴头菌多糖、银耳多糖、灵芝多糖、冬虫夏草多糖、云芝多糖、茯苓多糖、灰树花多糖等。目前，已有多种真菌多糖应用于临床，使得多糖生物资源的研究和开发日益活跃，成为生物学、医学、药物学、食品科学等领域的研究热点。 

陇南康县位于甘肃省东南部，陕、甘、川三省交界地带，是珍贵的天然植物宝库。境内气候属典型亚热带向暖温带过渡气候，温和湿润，雨量充沛，自然资源十分丰富。鸡油菌是陇南康县地区生长的一种具有生理活性的野生食用菌，别名黄丝菌、杏菌，属真菌界、担子菌门、同担子菌纲、鸡油菌目、鸡油菌科和鸡油菌属。在我国主要分布于云南、贵州、四川、湖南、甘肃、安徽、陕西、江苏等省。研究表明，鸡油菌富含胡萝卜素、V_A、V_C、多糖物质、钙、铁、磷等矿质元素和人体必需的8种氨基酸，其性平、味甘具有清肝、明目、利肺、减肥和抗衰老等多种功效。鸡油菌多糖具有多种生理活性，能够促进人体免疫功能，具有抗肿瘤、抗病毒、抗突变、抗辐射、降血压等功能。目前，鸡油菌的开发基本依靠野生资源，存在菌种污染率高、生长周期长、工艺复杂等问题。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种操作简单、成本低、多糖得率高的鸡油菌菌丝多糖的提取方法。 

为解决上述问题，本发明所述的一种鸡油菌菌丝多糖的提取方法，包括以下步骤： 

⑴制备马铃薯葡萄糖斜面培养基：将马铃薯洗净去皮切碎，按其质量的4~6倍加水煮沸25~35min后用纱布过滤，得到滤液A，该滤液A补足至1.0L依次加入5~10g葡萄糖和5~10g琼脂，使其pH值为6.0~8.0，在90~100℃温度下充分加热溶解后分装，在压强为1.05Kg/cm²、温度为121℃的条件下灭菌20min即得；

⑵制备种子培养基：将马铃薯洗净去皮切碎，按其质量的4~6倍加水煮沸25~35min后用纱布过滤，得到滤液B，该滤液B补足至1.0L加入5~10g葡萄糖，使其pH值为6.0~8.0，在90~100℃温度下充分加热溶解后分装，在压强为1.05Kg/cm²、温度为121℃的条件下灭菌20min即得；

⑶制备发酵培养基：将马铃薯洗净去皮切碎，按其质量的4~6倍加水煮沸25~35min后用纱布过滤，得到滤液C，该滤液C补足至1.0L加入5~10g葡萄糖，使其pH值为6.0~8.0，在90~100℃温度下充分加热溶解后分装，在压强为1.05Kg/cm²、温度为121℃的条件下灭菌20min即得；

⑷真菌的发酵培养：接一环鸡油菌菌丝至所述马铃薯葡萄糖斜面培养基上，于28℃恒温培养4~10天后，置于4℃冰箱中，得到斜面菌种；

⑸将1cm²所述斜面菌种接种至装有10mL所述种子培养基的试管中，并置于恒温振荡器上，在28℃条件下以100~200 r/min的速率进行振荡培养4~10天，制得pH值为5.0~7.0的菌种种子液；

⑹将所述菌种种子液按5~20%的接种量接种至含有所述发酵培养基的摇瓶中，并置于恒温振荡器上，在28℃条件下以100~200 r/min的速率进行振荡培养4~10天，即得发酵液；所述发酵液在高速冷冻离心机中于5000r/min离心10~30min，得到菌丝体；所述菌丝体用蒸馏水洗涤后在真空干燥箱于50~80℃下烘干至恒重后磨成粉，得到菌丝体干粉末；所述发酵培养基在所述摇瓶中的装瓶量为10~30%；

⑺在所述菌丝体干粉末中按1 g：10 mL ~30mL的料液比加入去离子水，在功率为100~300W的条件下超声提取20~40 min后，在温度为70~90℃的条件下浸提次数2~4次，每次0.5~2h，合并提取液，得到多糖浸提液；

⑻将所述多糖浸提液在高速冷冻离心机中于4000r/min离心10~20min过滤后，得到上清液A，该上清液A在温度为50℃、真空度为0.06~0.08MPa的条件下浓缩至原上清液A体积的1/5~1/3，得到多糖浓缩液；