[发明专利]一种鱼类高迁移率族蛋白及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体的说是一种半滑舌鳎高迁移率族蛋白及其应用。

背景技术

High mobility group box B2（HMGB2）是高迁移率族蛋白（High mobility group protein）家族的成员。高迁移率族蛋白是一种高度保守的非组蛋白类DNA结合蛋白，其分子量约为24kDa。HMG蛋白广泛存在于真核细胞中，具有维持核小体结构和调节基因转录的功能，近来发现它是炎性反应强有力的促炎因子。HMG既可以从凋亡细胞中释放到胞外，也可以被IL-1β,TNF-α,IFN-γ等激活的细胞分泌到胞外。胞外HMG蛋白可以调节多种免疫和炎症反应，比如激活炎症细胞，刺激细胞因子的产生和细胞增殖。HMG蛋白可激活DC细胞并诱导DC细胞成熟，使其在外周组织获得的外源性抗原提呈给未致敏T细胞，从而启动免疫反应。同时HMG蛋白也通过激活巨噬细胞从而释放一系列炎性因子引起炎症反应。因此HMG蛋白是免疫系统中一种关键的细胞因子。

发明内容

本发明目的在于提供一种半滑舌鳎高迁移率族蛋白HMGB2及其应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种鱼类高迁移率族蛋白，高迁移率族蛋白为半滑舌鳎高迁移率族蛋白，由序列表SEQ ID No.1中的氨基酸序列所示。

鱼类高迁移率族蛋白的制备方法：

以半滑舌鳎cDNA为模板，用引物F1和R1进行PCR扩增，PCR产物纯化后与经SwaI酶切后的质粒pET259用T4DNA连接酶连接，连接液转化入大肠杆菌，筛选转化子提取质粒，即为含SEQ ID No.1中氨基酸序列所示的质粒pEHMGB2；质粒经纯化，即得到由序列表SEQ ID No.1中的氨基酸序列所示；

所述F1为5’-GATATCATGACAAAGGACCCTAATAGACC-3’；R1为5’-GATATCTTCATCATCGTCATCATCAT-3’。

鱼类高迁移率族蛋白的应用：所述序列表SEQ ID No.1中的氨基酸序列的高迁移率族蛋白可用于制备抗细菌或病毒的药物。

所述细菌为迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)；所述病毒为细胞肿大病毒（megalocytivirus）。

本发明具有如下优点：本发明的高迁移率族蛋白HMGB2能够显著抑制鱼类病原性细菌和病毒侵染。

附图说明

图1为本发明实施例提供的经纯化的高迁移率族蛋白HMGB2蛋白电泳检测图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。实施例旨在对本发明进行举例描述，而非以任何形式对本发明进行限制。

在本发明实施例中所涉及到的常规性实验方法均采用如下方法：

1.质粒提取、DNA(PCR)产物纯化、DNA片段从凝胶中回收皆使用“天根生化科技(北京)有限公司”的相应试剂盒。

2.大肠杆菌用Hanahan方法（Sambrook and Russell:Molecular Cloning:A Laboratory Mannual.Cold Spring Harbor Laboratory Press 2001）。

3.所有限制性内切酶和连接酶皆购自于“纽英伦生物技术有限公司”，北京。

实施例1

本发明的核因子45为序列表SEQ ID No.1中的氨基酸序列。

序列表SEQ ID No.1为：

MTKDPNRPRGKTSSYAFFVATCREEHKKKHPGTSVNFSEFSKKCSERWKTKSGKEKGKFE

ELAKNDKVRYEREMKTYVPPKGAKKGKKEKDPNAPKRPPSAFFVFCSDHRPRIKEEHPGI

SIGEIAKKLGELWSTQSSKDKAPYEAKAAKLKEKYEKEVAAYRAKSGTGKSDAGKKSGPG

RPPKKAEPADDDDDDDDDEEEDDDDDDDDDDE

（a）序列特征：

●长度：212

●类型：氨基酸序列

●链型：单链

●拓扑结构：线性

（b）分子类型：蛋白质

（c）假设：否

（d）反义：否

（e）最初来源：半滑舌鳎