[发明专利]用ISSR分子标记法对甘薯品种真实性进行鉴别的方法

权利要求书

1.一种用于辅助鉴定甘薯种薯真实性的引物组，由HBAAS-001引物、HBAAS-815引物和HBAAS-825引物组成；

HBAAS-001引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

HBAAS-815引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

HBAAS-825引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

2.一种用于辅助鉴定甘薯种薯真实性的试剂盒，该试剂盒由权利要求1所述的引物组、PCR扩增缓冲液，dNTP，DNA聚合酶和ddH₂O组成。

3.一种指纹图谱，分别以权利要求1所述引物组的三条引物对16种甘薯品种的叶片的DNA分别进行PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，得到每条引物针对每个甘薯品种的谱带，即为权利要求1所述引物HBAAS-001对16种甘薯品种构建的指纹图谱、引物HBAAS-815对16种甘薯品种构建的指纹图谱和引物HBAAS-825对16种甘薯品种构建的指纹图谱；

所述16种甘薯品种为广薯菜2号、商薯19、尚志12、徐紫薯1号、鲁薯3号、徐薯26、徐薯43-14、苏薯10号、苏薯3号、苏薯11号、徐薯55-2、徐紫8008、莆薯53、台农71、徐22-5和台农66；

所述琼脂糖凝胶的浓度为4%，琼脂糖与电泳缓冲液的比例为4g：100ml。

4.一种用于辅助鉴定甘薯种薯真实性的方法，分别以权利要求1所述引物组的三条引物对待测甘薯种薯进行PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，得到PCR产物条带；

PCR产物条带X由如下（1）-（3）所示的PCR产物条带组成：

（1）以待测甘薯种薯的叶片的DNA为模板，用权利要求1所述的HBAAS-001扩增得到的PCR产物条带，记作PCR产物条带Xa；

（2）以待测甘薯种薯的叶片的DNA为模板，用权利要求1所述的HBAAS-815扩增得到的PCR产物条带，记作PCR产物条带Xb；

（3）以待测甘薯种薯的叶片的DNA为模板，用权利要求1所述的HBAAS-825扩增得到的PCR产物条带，记作PCR产物条带Xc；

若PCR产物条带Xa与以权利要求1所述的HBAAS-001为引物，分别以16种甘薯品种的叶片的DNA为模板得到的16种甘薯品种的PCR产物条带均不相同，则所述待测甘薯种薯不属于16种甘薯品种的任一种；

若PCR产物条带Xb与以权利要求1所述的HBAAS-815为引物，分别以16种甘薯品种的叶片的DNA为模板得到的16种甘薯品种的PCR产物条带均不相同，则所述待测甘薯种薯不属于16种甘薯品种的任一种；

若PCR产物条带Xc与以权利要求1所述的HBAAS-825为引物，分别以16种甘薯品种的叶片的DNA为模板得到的16种甘薯品种的PCR产物条带均不相同，则所述待测甘薯种薯不属于16种甘薯品种的任一种；

若PCR产物条带Xa与以权利要求1所述的HBAAS-001为引物，分别以16种甘薯品种的叶片的DNA为模板得到的16种甘薯品种中的A种甘薯的PCR产物条带完全相同，PCR产物条带Xb与以权利要求1所述的HBAAS-815为引物，分别以16种甘薯品种的叶片的DNA为模板得到的16种甘薯品种中的A种甘薯的PCR产物条带完全相同，PCR产物条带Xc与以权利要求1所述的HBAAS-825为引物，分别以16种甘薯品种的叶片的DNA为模板得到的16种甘薯品种中的A种甘薯的PCR产物条带完全相同，则所述待测甘薯种薯为A种甘薯；

所述琼脂糖凝胶的浓度为4%，琼脂糖与电泳缓冲液的比例为4g：100ml；

所述16种甘薯品种为广薯菜2号、商薯19、尚志12、徐紫薯1号、鲁薯3号、徐薯26、徐薯43-14、苏薯10号、苏薯3号、苏薯11号、徐薯55-2、徐紫8008、莆薯53、台农71、徐22-5、台农66。

5.权利要求1所述的引物组在辅助鉴定甘薯种薯真实性中的应用或在辅助鉴定甘薯品种真实性中的应用。

6.权利要求2所述的试剂盒在辅助鉴定甘薯种薯真实性中的应用或在辅助鉴定甘薯品种真实性中的应用。

7.权利要求3所述的指纹图谱在辅助鉴定甘薯种薯真实性中的应用或在辅助鉴定甘薯品种真实性中的应用。

8.权利要求4所述的方法在辅助鉴定甘薯种薯真实性中的应用或在辅助鉴定甘薯品种真实性中的应用。