[发明专利]一种朱顶红标准化离体培养种苗的方法

说明书

技术领域

本发明提供一种朱顶红标准化离体培养种苗的方法，属于植物组织培养技术领域。

背景技术

朱顶红(Hippeastrum vittatum Herb.)是单子叶亚纲石蒜科（Amaryllidaceae）朱顶红属（Hippeastrum Herb.）所有种类的总称，原产于中南美洲，即从阿根廷北部到墨西哥以及加勒比海。朱顶红花枝亭亭玉立，4～6朵喇叭形花朵着生于顶端，给人华贵之感，叶片狭长如君子兰，即使在无花期也有很高的观赏价值。朱顶红一般通过分球繁殖，但繁殖率很低，无法满足生产与市场的需要。因此，离体培养朱顶红种苗可以大幅提高其繁殖系数，具有很好的现实意义。

朱顶红组织培养技术自20世纪80年代就开始研究，多年来国内外科研工作者经过不懈努力已有了一定的发展，但是真正要运用组培技术实现标准化工厂化育苗，还有待突破。

发明内容

为解决运用组培技术实现朱顶红的标准化育苗问题，本发明从标准化离体培养朱顶红种苗的角度出发，以朱顶红杂交优良株系的鳞茎为试验材料，以MS为基础培养基附加不同浓度的激素即ZT、NAA来诱导不定芽、继代增殖及生根，并提供一种诱导、继代及生根时的切苗方法及培养条件，以实现标准化工厂育苗。

本发明通过下列技术方案实现：一种朱顶红标准化离体培养种苗的方法，其特征在于经过下列各步骤：

（1）将朱顶红杂交株系的小鳞茎依次在质量浓度为75-80%的酒精中消毒灭菌20～40秒、质量浓度为0.1-0.15%的氯化汞溶液中消毒灭菌10～20分钟、、质量浓度为2-3%的次氯酸钠溶液中消毒灭菌5～10分钟，然后用无菌水漂洗3次；

（2）将步骤（1）消毒后的小鳞茎在无菌工作环境中纵剖成块后，再接种于下列培养基中：MS培养基+2.0～5.0mg/L的ZT+0.1～0.3mg/L 的NAA+100～300mg/L 的活性炭+30～40g/L的糖+6g/L的琼脂，控制pH为5.6～5.8，并在温度为22～26℃、光照强度为1500～2200Lx、光照时间为12～16h/天的条件下，进行诱导培养至生成不定芽；

（3）将步骤（2）所得不定芽在无菌工作环境中切块后，置于下列培养基中：MS培养基+3.0～5.0mg/L的ZT+0.1～0.5mg/L的NAA +100～300mg/L的活性炭+20～60mg/L的硫酸腺嘌呤+30～40g/L的糖+6g/L的琼脂，控制pH为5.6～5.8，并在温度为22～26℃、光照强度为1500～2200Lx、光照时间为12～16h/天的条件下，进行继代培养，每30天继代一次，每次继代更换一次上述培养基，并对不定芽进行纵剖，继代培养直至得到增殖苗；

（4）将步骤（3）所得增殖苗切分成单株后，置于下列培养基中：MS培养基+0.3～0.5mg/L的IBA+0.3～0.5mg/L的NAA+100～300mg/L的 活性炭+30～40g/L的糖+6g/L的琼脂，控制pH为5.6～5.8，并在温度为22～26℃、光照强度为1500～2200Lx、光照时间为12～16h/天的条件下，进行生根培养20～30天，得到生根苗；

（5）将步骤（4）所得生根苗置于塑料大棚苗床上，于自然光照下驯化15～20天，再将生根苗洗净后，置于质量浓度为0.1-0.2%的甲基托布津中浸泡1min，然后置于下列基质中定植：腐殖土:珍珠岩的体积比=3:1，待30～40天后得到移栽苗。

所述步骤（2）的纵剖成块是将小鳞茎纵剖成带有基盘的块状。

所述步骤（3）中对不定芽进行纵剖是将大的不定芽纵剖四分切，小的不定芽纵剖二分切。

本发明通过采取朱顶红杂交优良株系的鳞茎诱导不定芽、继代增殖、生根培养及炼苗后获得朱顶红种苗，以朱顶红杂交优良株系的鳞茎为试验材料，以MS为基础培养基附加不同浓度的激素即ZT、NAA来诱导不定芽、继代增殖及生根、炼苗后最终获得种苗，解决了朱顶红繁殖效率低无法实现工厂化生产的问题。本发明在标准化离体培养朱顶红种苗的过程中，主要解决了下列难题：高效诱导出朱顶红不定芽，筛选出繁殖系数达3的培养基配方，摸索出不同培养阶段的切苗方法，缩短了朱顶红繁殖的周期。本发明具备下列优点和效果：

（1）提供了获得朱顶红不定芽的技术，实现了朱顶红无性系的诱导方法；

（2）针对朱顶红继代增殖率低的问题，采用适宜的培养基配方及切苗方法提高了朱顶红离体培养的效率；