[发明专利]一株产雷公藤甲素的内生细菌

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株具有雷公藤甲素合成功能的内生细菌。 

背景技术

早在100 多年前人们已经发现在健康植物组织的内部也有微生物存在,但由于它们生活在没有外在感染症状的健康植物组织内部,其存在和作用长期以来一直为人们所忽视。自20世纪30年代发现造成畜牧业重大损失的牲畜中毒是由于食用感染内生菌的牧草后,内生菌的研究才得以广泛地开展起来。内生菌 ( Endophyte)一词由De Bary于1866年首先提出,直到1992年Kloepper第一次提出了植物内生细菌的概念。相对其它学科来说,植物内生细菌的研究尚缺乏一定的系统性,但近年来,随着研究领域的不断拓宽和研究方法的不断深入,植物内生细菌所发挥的重要的生态和生理作用及其作为潜在生防资源和外源基因载体,在农业和医药领域中的巨大应用潜力,已逐渐成为国内外研究的热点。自1898年Vogl从黑麦草种子内分离出第一株内生细菌以来, 植物内生菌作为一种新的微生物资源受到了广泛的关注, 从内生菌中寻找和发现新的活性化合物已成为国内外研究的又一热点。有研究表明,内生细菌存在于所有植物种类当中, 药用植物内生细菌能够产生与宿主植物相同或相似的药用活性成分,特别是还发现许多新的活性成分, 这些活性成分被证明具有明显的抗癌、抗菌、抗氧化等活性。随着对药用植物资源研究的不断深入，一些寄生于药用植物体内的内生细菌被发现不但对宿主次生代谢产物的产生具有明显的促进作用，而且自身也会代谢产生相同或类似的植物源药用物质。从药用植物内部筛选与开发具有药用价值的内生菌资源，寻找新的抗菌活性物质，进而为植物源药物的生产开辟新途径已成为该领域的研究重点与热点。药用植物内生细菌有望部分代替药用植物作用, 从而解决药用植物资源短缺的问题。因此，利用药用植物内生细菌开发新药源具有极大的可能性。同时，内生细菌易于发酵培养，便于组织工业化生产，利用内生细菌发酵实现生物活性物质的工业化生产，可以提高产量、降低产品成本，满足市场的需求；另外，从内生细菌中提取单体代替以前的从植物中提取单体，还可解决许多植物因作为药用资源而被大量采伐引起的资源和生态危机，有利于珍稀濒危药用植物资源的保护。 

雷公藤为卫矛科雷公藤属木质藤本植物, 是我国重要的传统药用植物。然而，雷公藤药用成分含量极低，加之野生资源蕴藏量少，人工栽培又存在生长缓慢，收获期长的问题，远远无法满足市场需求，已成为我国珍贵紧缺中药材。所以对雷公藤内生细菌的提取具有非常重要的意义，但是此方面的研究却未见报道。 

发明内容

本发明的目的在于提供一株能产生雷公藤甲素的内生细菌，可作为工业发酵用菌株，生产雷公藤甲素，其产量高，具有较高的应用价值。 

一株产雷公藤甲素的内生细菌，其特征在于：该菌株为菠萝泛菌（Pantoea ananatis），菌株号为LY-3，已于2013年3月27日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，其微生物保藏号是CGMCC No.7371，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号。 

形态鉴定：本发明的内生细菌从雷公藤组织上分离、纯化获得，其在平面培养基上，正面黄色，背面黄褐色，单个圆形；周生鞭毛；菌落常表现为圆形、湿润、光滑、质地均匀，如图1所示。 

  

序列测定： LY-3菌株由宝生物工程（大连）有限公司16s rDNA扩增及序列测定，并通过在NCBI中比对，鉴定为菠萝泛菌（Pantoea ananatis）。

产物分析：LY-3菌株发酵产物中含有雷公藤甲素，生长48h后，其产生的雷公藤甲素浓度为0.0821g/L。 

本发明的优点或有益效果：本发明中的雷公藤内生细菌LY-3具有合成雷公藤甲素的能力，且生长迅速，生产成本低，易于工业扩大化生产，同时可以保护野生植物资源，是生产雷公藤甲素的一种新方法。 

  

附图说明

图1 是LY-3菌株在平面培养基上的形态 

图2 是LY-3菌株的雷公藤甲素生成情况

图3是LY-3菌株16 S rDNA扩增结果，图中M：DL 2000 DNA Marker，1：LY-3菌株PCR扩增产物，+：正对照，-：负对照。

  

具体实施方式

    以下为本发明的具体实施例，进一步说明本发明，但本发明不仅限于此。 

实施例1：雷公藤菌株的分离纯化