[发明专利]牛奶制品中青霉素酶的AlphaLISA检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及牛奶制品中的青霉素酶的检测，具体涉及一种牛奶制品中青霉素酶的AlphaLISA检测试剂盒。

背景技术

牛乳中抗生素的残留问题越来越多的引起国际社会的关注，随着国家对乳及乳制品抗生素残留监管力度的增加，一些不法商贩在牛奶中非法添加青霉素酶，使牛乳在检测中达到合格标准。青霉素酶的过度使用会使人体产生过敏反应，更可能引起抗生素的滥用。现有的青霉素酶的检测方法有碘量法、酸度法、高效液相色谱法、酶联免疫法、头孢硝噻吩显色法以及杯碟法等。但是这些方法都有着诸如操作繁琐，检测灵敏度不高等缺点。特别是作为确证方法的杯碟法，操作过程需要进行微生物培养，然后将系列浓度梯度的标准品加入牛津杯，检测时间不少于3～5天，通量性极低。

发明内容

为解决上述问题，本发明通过AlphaLISA检测方法来检测牛奶制品中青霉素酶，提供了一种用于检测牛奶制品中青霉素酶的AlphaLISA检测试剂盒。

本发明采用的技术方案是：牛奶制品中青霉素酶的AlphaLISA检测试剂盒，包括青霉素酶标准品、生物素化青霉素酶、抗鼠IgG包被受体磁珠、链亲和素供体磁珠、抗青霉素酶单克隆抗体和检测缓冲液；其中所述抗鼠IgG包被受体磁珠包括100ug/mL受体磁珠（终浓度）、0.05%的Proclin-300和pH7.4的PBS溶液，链亲和素供体磁珠包括100ug/mL供体磁珠（终浓度）、25mM的HEPES、100mM的NaCl溶液和0.05%的Proclin-300。

上述试剂盒中所述抗鼠IgG包被受体磁珠为1 mg/mL，链亲和素供体磁珠为1 mg/mL，抗青霉素酶单克隆抗体为1 mg/mL，生物素化青霉素酶0.5mg/mL。

使用时，以总体积25uL计：其中抗鼠IgG包被受体磁珠5uL、链亲和素供体磁珠5uL、抗青霉素酶单克隆抗体5uL、生物素化青霉素酶5uL、待测样品5uL。

本发明的试剂盒封装时，包括青霉素酶标准品（5000 UI/mL，100 uL/盒）、生物素化青霉素酶（0.5 mg/mL，100 uL/盒）、抗青霉素酶单克隆抗体（1 mg/mL，20 uL/盒）、抗鼠IgG包被受体磁珠（1 mg/mL，50 uL/盒）、链亲和素供体磁珠（1 mg/mL，50 uL/盒）、检测缓冲液（100 mL/盒）、白色反应板（96T，1块/盒）、封口膜（1块/盒）、操作说明书（1份/盒）。

借由上述技术方案，本发明至少有一下优点和有益效果：利用本发明检测牛奶中的青霉素酶，样品用量少仅使用5uL即可、灵敏度高、不需洗涤、检测周期短等优点。

附图说明

图1为青霉素酶标准曲线示意图；

图2为AlphaLISA检测反应过程示意图;

图中：1-链亲和素供体磁珠，2-生物素化青霉素酶，3-抗青霉素酶单克隆抗体，4-青霉素酶，5-抗鼠IgG包被受体磁珠。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。

试剂盒中的抗青霉素酶单克隆抗体可选用市购的，也可用常规制备单克隆抗体的方法制备。链亲和素供体磁珠包括100ug/mL供体磁珠、25mM的HEPES、100mM的NaCl溶液和0.05%的Proclin-300。检测缓冲液选用常规检测试剂盒中的缓冲液。

一、抗鼠IgG包被受体磁珠的制备

1.洗涤受体磁珠：取5～50μL（20mg/mL）的受体磁珠于1.5mL的离心管中，加入50μL的PBS（pH=7.4），14000r/min离心15min，去上清。

2.偶联：（400mM的NaBH3CN，现配：25mg NaBH3CN+1mL水）配制如下体系（20μL）：5μL受体磁珠（20mg/mL）+10μL抗鼠IgG抗体（1mg/mL）+1μL NaBH3CN+0.125μL的10%TW20+3.875μL的HEPES Buffer。

    在37℃条件下，6～10r/min振荡反应18～24h。

3.封闭：（用800mM的NaOH配制65mg/mL的CMO，现配：5mL≈325mg）向管中加入10μL的CMO Buffer，在37℃条件下，6～10r/min振荡反应1h。