[发明专利]一种ZL006脂质体及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种脂质体物质及其制备，尤其是新化合物ZL006的脂质体及其制备方法和应用。

背景技术

脑卒中是一种高致死、高致残、高复发的神经系统疾病，临床上80%以上的脑卒中属于缺血性脑卒中。研究显示：脑组织在缺血条件下，兴奋性氨基酸（如谷氨酸）过度释放，引起N-甲基-D天门冬氨酸受体（NMDAR）过度激活，导致通过NMDAR-PSD-95-nNOS途径病理性一氧化氮（NO）释放增多，提示缺血性脑卒中的产生可能与细胞浆内的nNOS和细胞膜上新PSD95结合增多有关。ZL006是一种小分子nNOS-PSD-95解偶联剂，其化学名为4-（2-羟基-3,5-二氯苄胺基）-2-羟基苯甲酸。结构如下图所示：

研究表明，ZL006能够有效抑制nNOS从细胞浆到细胞膜的转位，抑制NO的病理性释放，对谷氨酸刺激下的神经细胞损伤显示出明显的神经保护作用，改善中脑动脉闭塞（MCAO）再灌注动物神经缺陷症状、缩小梗死容积。同时，ZL006避免了直接干预NMDAR、nNOS可能引起的学习记忆障碍、行为异常等副作用，具有很高的安全性。由于ZL006的亲水性较强，透过血脑屏障能力有限，对其发挥治疗作用有一定程度的限制。

脂质体作为类脂质双分子层结构的纳米递药系统，可将药物ZL006包封于脂质双分子层中，提高其透过血脑屏障的能力，增加其向靶组织分布的机会。目前脂质体的制备方法主要有薄膜分散法、逆向蒸发法、冷冻干燥法、注入法等。在选择合适的方法将ZL006制成脂质体后，后期可以对其进行靶向修饰，以实现脂质体脑内双级靶向递送。

发明内容

本发明的目的是，提出一种ZL006脂质体及其制备方法。使ZL006脂质体透过血脑屏障的能力大大增强，充分发挥其治疗作用。

本发明的技术方案是，ZL006脂质体，由脂质双分子层和ZL006组成，脂质双分子层的脂质材料和ZL006的重量比为10-4:1，优选6:1。

脂质双分子层是指脂质聚集形成的形式，疏水性的脂肪链朝向外边而亲水性的极性基团朝向中间。

所述脂质材料为磷脂、胆固醇或鞘脂，是组成生物细胞膜的基本材料；包括大豆磷脂、大豆卵磷脂、氢化大豆磷脂、大豆磷脂酰丝氨酸、大豆磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺、蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄磷脂、蛋黄磷脂酰甘油、蛋黄磷脂酰丝氨酸、蛋黄磷脂酰肌醇、脑磷脂、神经鞘磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱等磷脂材料和胆固醇、牛胆酸钠、胆固醇乙酰酯等材料中的一种或几种的混合物，优选大豆磷脂和胆固醇。

选用磷脂、胆固醇混合的脂质材料更好，磷脂与胆固醇的重量比例为2-10:1。

所述脂质材料中大豆磷脂和胆固醇的重量比例为2:1、4:1、6:1、8:1、10:1，优选4:1。

本发明提供的ZL006脂质体可由注入法或薄膜分散法制备得到，优选注入法。

注入法包括下述步骤：（1）将ZL006、上述成分（包括重量比例）的脂质材料溶解于有机溶剂中，（涡旋）溶解并使之混合均匀，得到有机相，所述有机溶剂为无水乙醇或乙醚，优选无水乙醇；

（2）用微量注射器把有机相逐滴加入到不断搅拌的水相中，所述条件为温度50±10℃，搅拌速度150-750rpm，如150、350、550、750rpm，优选550rpm；

（3）减小粒径后减压（旋转）蒸发除去有机溶剂，然后分别经0.45μm和0.22μm的微孔滤膜过滤，得到ZL006脂质体。

或采用薄膜分散法，包括下述步骤：（1）将ZL006、脂质材料溶解于有机溶剂中，涡旋溶解并使之混合均匀，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、正己烷和乙腈等溶剂中的一种或几种混合物，优选氯仿；

（2）减压（旋转）蒸发除去有机溶剂在瓶壁上形成薄膜；

（3）使薄膜彻底干燥，所述干燥方法为减压真空干燥，温度为40℃，真空度-0.1MPa；

（4）加入缓冲液，水浴超声使得薄膜充分水化；

（5）减小粒径，然后分别经0.45μm和0.22μm的微孔滤膜过滤，得到ZL006脂质体。

上述注入法或薄膜分散制备ZL006脂质体步骤中，注入法所述水相和薄膜分散法所述水化薄膜溶液的缓冲液为磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、柠檬酸、柠檬酸钠、氢氧化钠、醋酸和醋酸钠中的一种或几种混合物，优选醋酸盐缓冲液。

所述缓冲液的pH为3.0-8.0，优选4.0，具体浓度是0.1mol/L。