[发明专利]一种结核杆菌痰标本液化剂试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明属于医学标本检测技术领域，具体涉及一种结核杆菌痰标本液化剂试剂盒及其应用。

背景技术

常规的结核痰标本的检测要求是一个痰标本既要做直接涂片抗酸染色镜检也要作分离培养，涂片染色镜检可以马上出报告，而出报告时间很长的分离培养则用于标本的耐药性试验，目前涂片染色镜检的阳性检出率较低，部分原因是由于结核杆菌在痰标本内的分布是不均匀的，现有技术主要是经手工挑取脓样、干酪样的痰标本直接涂片然后染色镜检，因此在涂片时能不能挑选到含菌部分的痰标本对阳性检出率的高低至关重要，这里面存在着很大的随机误差，因此需要将痰标本液化后再涂片以减少随机误差。

《中国防痨杂志》2013年2月，第35卷第2期，P.93和《结核病诊断实验室检验规程》，中国防痨协会基础专业委员会，中国教育文化出版社，2006年1月，P.34中介绍了现有结核痰标本的液化碱处理-直接法和N-乙酰-L-半胱氨酸-氢氧化钠法。上述两种痰标本液化方法主要用于结核杆菌的分离培养而不能用于涂片，因为用强碱液化后痰标本的粘度会大幅降低，涂片做抗酸染色镜检时标本脱片严重。

所以目前主要还是手工挑取痰标本直接涂片不作液化处理，只是涂片后需要作分枝杆菌的分离培养时才将痰标本液化，在这里氢氧化钠除了液化剂的作用外还有去除痰中杂菌的作用。如果要将氢氧化钠液化后的痰标本作涂片,那么就得将痰标本作4至10多倍体积比的中和稀释，离心沉淀后涂片。离心过程有可能使细菌扩散，造成环境污染，并且自动化实现的难度也较大，所以无法临床应用。

综上所述，采用目前的液化方法处理的痰标本无法用于直接涂片抗酸染色镜检，涂片前痰标本是不作液化处理的，另外从液化剂的作用机理来看，现有技术强碱是使痰标本中的粘蛋白变性增加水溶性，而巯基还原剂比如N-乙酰-L-半胱氨酸和二硫苏糖醇等是将粘蛋白间的二硫键打开增加水溶性，但是痰液中除了二硫键外还有大量的疏水性的氢键，现有技术并不能有效打开氢键，因此上述液化剂的液化效果并不好，还需要作一倍以上的等体积稀释和离心，多了实验步骤。

临床上迫切需要一种能够临床推广，既能提高涂片质量和抗酸染色镜检的阳性检出率同时符合去污处理和分离培养要求，操作简便快捷的结核痰标本液化剂试剂盒及其使用方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是目前的结核杆菌痰标本液化剂无法在不离心的情况下制备出可用于高质量涂片的痰标本，为了克服以上不足，提供了一种结核杆菌痰标本液化剂试剂盒及其应用。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案是：所述结核杆菌痰标本液化剂试剂盒，包括液化剂R1和液化剂R2，所述液化剂R1为氨水，所述液化剂R2为巯基还原剂的水溶液。

液化剂R1能快速高效地打开痰标本中粘蛋白间疏水性的氢键，而液化剂R2则能快速高效地打开粘蛋白间的二硫键，液化所需液化剂用量少，保证了单位体积细菌数量没有明显下降，省去了离心分离步骤，涂片后玻片上的痰膜不易脱落，

作为优选，所述氨水为浓氨水或浓氨水的稀释液，所述浓氨水中氨的质量百分浓度为25～28%。

作为优选，所述氨水为浓氨水或浓氨水和水的混合物，所述浓氨水中氨的质量百分浓度为25～28%，所述氨水由重量百分比为（10～100%）:（90～0%）的浓氨水和水制备获得。

作为优选，所述巯基还原剂选自β-巯基乙醇、N-乙酰-L-半胱氨酸和二硫苏糖醇中的一种或更多种。

作为优选，所述液化剂R2中β-巯基乙醇的浓度为3.0-30.0mg/mL,所述N-乙酰-L-半胱氨酸的浓度为1.0-40.0mg/mL，所述二硫苏糖醇的浓度为5.0-50.0mg/mL。

本发明还提供了一种上述结核杆菌痰标本液化剂试剂盒的应用，用于结核杆菌抗酸染色镜检和分离培养前痰标本的液化。

作为优选，所述结核杆菌痰标本包括干酪样痰、血液痰、粘液痰和唾液中的一种或更多种。

作为优选，所述液化剂R1与结核杆菌痰标本的体积比为(0.05～0.5):(3～5)，液化剂R2与结核杆菌痰标本的体积比为(0.05～0.5):(3～5)。

作为优选，所述液化剂R1、液化剂R2与结核杆菌痰标本通过旋涡震荡搅拌5-10分钟，实现结核杆菌痰标本的液化。

作为优选，所述结核杆菌痰标本液化后涂布在玻片上制成涂片用于结核杆菌抗酸染色镜检。

作为优选，所述结核杆菌痰标本液化后经去污处理接种于酸性改良罗氏培养基上分离培养。

本发明提供的技术方案与现有技术相比存在以下优点：