[发明专利]一种端粒酶活性检测方法

权利要求书

1.一种端粒酶活性检测方法，通过比色法和SERS技术双信号通道检测端粒酶活性，其特征在于，包括如下步骤：

第一步，利用CHAPS法提取待测细胞中的端粒酶，得到待测端粒酶提取物；

第二步，利用捕获基底和待测端粒酶进行延伸反应，延伸反应产物与报告标签溶液进行杂交反应；所述的捕获基底为金壳包裹的四氧化三铁纳米粒子表面连接端粒酶底物；所述的报告标签为球形金纳米粒子表面连接端粒互补序列和拉曼分子；

第三步，杂交反应产物通过比色法观察颜色或采用SERS技术双信号通道检测得到SERS信号。

2.根据权利要求1所述的端粒酶活性检测方法，其特征在于，所述捕获基底为核壳结构，由内核层、中间壳层、外壳层组成，所述内核层为四氧化三铁纳米粒子，所述中间壳层为二氧化硅壳层，所述外壳层为金壳层；所述二氧化硅壳层表面修饰氨基，所述金壳层表面连接端粒酶底物。

3.根据权利要求2所述的端粒酶活性检测方法，其特征在于，所述四氧化三铁纳米粒子采用溶剂热法制备，所述二氧化硅壳层采用改进的法制备，所述金壳层采用种子生长法制备。

4.根据权利要求1或2所述的端粒酶活性检测方法，其特征在于，所述端粒酶底物的序列为5'-SH(CH₂)₆TTTTTTTTTTAATCCGTCGAGCAGAGTT-3'，如SEQ ID NO.1所示；所述端粒酶底物通过金-硫键以共价方式连接在捕获基底的金壳层表面。

5.根据权利要求1所述的端粒酶活性检测方法，其特征在于，所述球形金纳米粒子采用柠檬酸钠还原法制备。

6.根据权利要求1所述的端粒酶活性检测方法，其特征在于，所述端粒互补序列为5'-CCCTAACCCTAAAAAA(CH₂)₃SH-3'，如SEQ ID NO.2所示；所述端粒互补序列通过金-硫键以共价的方式连接在球形金纳米粒子表面。

7.根据权利要求1所述的端粒酶活性检测方法，其特征在于，所述拉曼分子为5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)，通过金-硫键以共价的方式连接在球形金纳米粒子表面。

8.根据权利要求2所述的端粒酶活性检测方法，其特征在于，所述捕获基底的制备方法，包括如下步骤：

第一步，采用溶剂热法制备四氧化三铁纳米粒子；

第二步、采用改进的法在第一步制备的四氧化三铁纳米粒子表面包裹二氧化硅壳层，再进一步将二氧化硅壳层表面修饰氨基；

第三步、采用种子生长法在第二步制备的表面氨基修饰的二氧化硅壳层包裹的四氧化三铁纳米粒子表面包裹金壳层；

第四步、在第三步制备的金壳层包裹的四氧化三铁纳米粒子表面连接端粒酶底物，得到捕获基底。

9.根据权利要求1所述的端粒酶活性检测方法，其特征在于，所述报告标签的制备方法，包括如下步骤：

第一步、采用柠檬酸钠还原法制备球形金纳米粒子；

第二步、在第一步制备的球形金纳米粒子表面连接端粒互补序列和拉曼分子。