[发明专利]一种血液检验中细菌反接鉴定的方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学病害微生物鉴别技术领域，具体是提供一种简单且准确的血液检验中细菌反接鉴定的方法。

背景技术

人体正常的血液是没有细菌的。当人体受到细菌感染后，根据受细菌感染程度的不同，可以简单地把血液受细菌感染引起的病症分为菌血症、败血症、脓毒血症等。在抵抗力降低的情况下细菌感染人体一般先引起某一部分的炎症，如疖、痈、肺炎、脑炎等。医学上把因细菌由局部炎症部位进入血循环的病症称为菌血症。这时往往会有少量细菌侵入血液，如果人的全身情况很好，这少量的细菌会被身体里产生的各种抗体、吞噬细胞和血液里的白细胞消灭。而如果侵入血管的病菌很多，毒性很强，或者由于人体过劳、营养不良、严重创伤或有其他疾病等原因而抵抗力极其低下时，细菌会大量繁殖并产生有毒有害物质，随血流播散到全身。这时患者表现为高热、寒战、头痛等严重中毒症状，体温常高达40℃以上。同时，细菌可侵入各个脏器引起脏器的发炎、化脓。如果播散到皮肤，可出现各种皮疹。医学上把细菌进入血液后在血液中生长繁殖引起的病症称为败血症。如果是化脓性细菌进入血液后，不但在血液中繁殖，引起一些脏器形成脓肿甚至是器官功能障碍、组织灌注不良或低血压，这种病症则称之为脓毒血症。脓毒症病死率较高，大约有9％的脓毒症患者会发生脓毒性休克和多器管功能不全，重症监护室中一半以上的死亡是由脓毒性休克和多器官功能不全引起的。研究表明，出现脏器器官衰竭、休克、多重感染、严重的潜在疾病的患者预后较差。以上菌血症、败血症、脓毒血症这三种病症的一个共同点是患者血液中都有细菌。如果用患者血液做培养，即可以检出致病菌。因此，血液细菌培养和鉴定的结果对疾病的诊断与治疗具有重要意义。

一般来说，血液细菌培养的标本是由检验人员采集的，采集的标本经过孵育、移种，进行初步判断，然后再根据各种病原菌的生物学特性鉴定发出报告。但在实际临床检验中，采集的血样直接孵育培养，常常会出现某些特定的致病菌未能检出的情况。尤其是近年来，血液感染发生呈上升趋势，许多设备条件较好的医院基本均采用自动血液细菌培养的设备进行血液细菌培养，普遍地存在血培养的阳性率不够高，培养周期长，易出现污染导致错误结果等问题，这对临床治疗中选择用药、及时有效地控制感染和最后病人治疗效果都具有非常巨大的影响。

因此提供一种简单且准确的血液检验中细菌反接鉴定的方法具有非常重要意义。

发明内容

针对现有生产存在的技术问题，本发明的目的是提供一种操作简单、安全可靠、成本低廉的泡菜生花病害菌的分选挑取方法。

本发明方法根据科赫法则，采用传统微生物鉴定方法与临床血液检验方法进行结合。具体技术方案为一种血液检验中细菌反接鉴定的方法，其特征在于包括步骤：

1)取样培养：以无菌操作从血样中取样进行病原菌孵育，置于摇床中培养10～24h；

2)反接培养：取液面上层液作为样品，涂抹反接于血清培养基上，倒置于36℃恒温培养箱中恒温培养2～3d，观察菌落生长状况；

3)初步药敏：挑取病害菌，初步药敏测试；

4)鉴定：根据检验结果进行鉴定，视情况进行二次药敏测试。

本发明通过对疑似病害微生物进行接种培养后再反接培养，利用细菌培养后不同种类的微生物不同的生长特性和菌落特征使其得以区分并选取病害疑似菌进行药敏测试，为临床医生针对某一特定感染提供依据。本发明方法具有实验简单、成本低廉、易操作实施、重复性好等优点，能在一定程度上克服传统临床检验的局限。

具体实施方式

以下将结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。

实施例

试验原料和试剂

1)患者血样；

2)血清基础培养基：将血清均匀加热至56℃并保持30min，贮存于4℃，之后与基本培养基混合，基本培养基占80％～90％，血清占10％～20％。按1％体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素)；

3)药敏测试：哌拉西林他唑巴坦钠、庆大霉素、万古霉素、克林霉素、头孢呋辛钠、头孢噻肟钠。

试验步骤：

1)取样培养：以无菌操作从血样中取样进行病原菌孵育，置于摇床中培养10～24h；

2)反接培养：取液面上层液作为样品，涂抹反接于血清培养基上，倒置于36℃恒温培养箱中恒温培养2d,观察菌落生长状况；

3)初步药敏：挑取病害菌，初步药敏测试；

4)鉴定：根据检验结果进行鉴定，视情况进行二次药敏测试。