[发明专利]一株降解磺酰脲类除草剂的基因工程菌KT-puts2及其应用

说明书

技术领域

本发明属于为生物领域，涉及一株降解磺酰脲类除草剂的基因工程菌KT-puts₂及其应用。 

背景技术

磺酰脲类除草剂自问世以来由于其高效、广谱和高选择性的特性，迅速发展成为除草剂市场的主流。但是磺酰脲类除草剂在土壤中降解缓慢，在碱性土壤中残效期长达数月甚至几年，这些累积残留不仅会对后茬敏感作物产生药害，造成经济损失，而且还会对生态环境造成严重破坏。以微生物降解为基础的生物修复技术被认为是最具潜力的去除环境中有机污染物的方法。由于普通的磺酰脲除草剂降解菌施到污染土壤中以后受到土壤复杂环境以及土著微生物竞争的影响，往往会影响其存活状态和修复效果。如果能将从磺酰脲除草剂降解菌中克隆的磺酰脲除草剂去酯化酶基因导入到能够在适合在土壤中生存的菌株中，构建既具有降解功能又适合在土壤中的生存的基因工程菌，并生产菌剂，然后运用到磺酰脲除草剂污染土壤的生物修复中，将具有什么重要的意义。到目前为止还没有这方面的技术，迫切需要开发。 

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一株降解磺酰脲类除草剂的基因工程菌KT-puts₂。 

本发明的另一目的是提供基因工程菌KT-puts₂的应用。 

本发明的目的可以通过如下技术方案实现： 

一株降解磺酰脲类除草剂的基因工程菌KT-puts₂，该菌株是将SEQ ID NO.1所示的带有启动子p₂的sulE序列通过无标记同源重组的方法整合到恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）的模式菌株KT2440的染色体中而获得。 

其中SEQ ID NO.1所示的带有启动子p₂的sulE序列是将菌株S113（Methylophilus sp.）中磺酰脲除草剂去酯化酶基因sulE与适合在植物根际土 壤中发挥功能的启动子p₂进行无缝连接而获得。 

所述的基因工程菌KT-puts₂分类命名：恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期：2013.6.29，保藏编号：CCTCC NO：M2013284。 

用本发明所述的基因工程菌KT-puts₂生产的菌剂。 

本发明所述的菌剂的制备方法，包含如下步骤： 

1）将保藏号为CCTCC NO：M2013284的菌株KT-puts₂接种于LB培养基摇瓶中，振荡培养至对数期，LB培养基配方：酵母粉5g/L，蛋白胨10g/L，NaCl10g/L，pH值7.0-7.2； 

2）将上述培养好的菌种按体积比1%的接种量接种入1吨种子罐，培养至对数生长期，种子罐所用的培养基配方为：葡萄糖：9g/L；硫酸铵：0.8g/L；酵母膏：0.3g/L；磷酸氢二钾：1g/L；七水硫酸镁：0.5g/L；氯化钠：0.1g/L；碳酸钙：1g/L；pH：7.0-7.2，培养过程中无菌空气的通气量为20m³/hr，搅拌速度为180-240转/分，培养温度为30-35℃，全流程培养时间为48-60小时,发酵结束后菌体数量达到10亿/ml以上； 

3）将种子液按生产罐培养基的10%接种量接入生产罐培养，生产罐所用培养基与种子罐培养基，在种子罐和生产罐的培养过程中无菌空气的通气量为150-170m³/hr，搅拌速度为180-240转/分，培养温度为30-35℃，全流程培养时间为48-60小时,发酵结束后菌体数量达到10亿/ml以上，此时的培养液即为菌剂。 

本发明所述的基因工程菌KT-puts₂在磺酰脲类除草剂污染土壤的生物修复中的应用。 

本发明所述的基因工程菌KT-puts₂生产的菌剂在磺酰脲类除草剂污染土壤的生物修复中的应用。 

有益效果： 

本发明提供的菌株KT-puts₂可降解土壤中磺酰脲类除草剂，成功地解决了普通磺酰脲除草剂降解菌难以抵抗土壤的复杂环境和土著微生物竞争的问题。使用该菌株生产菌剂具有质量稳定，使用方便，施用效果好的优点，可以应用于磺酰 脲类除草剂污染土壤的生物修复。本发明对于保护生态环境，保护人民的身体健康具有重要的意义。