[发明专利]一种用于细胞培养的组织块的冷冻保存方法

权利要求书

1. 一种用于细胞培养的组织块的冷冻保存方法，其特征是，先将新取的动物组织匀浆处理成乳糜状，然后加入冷冻液混匀，分装到冷冻管中，之后放置在冷冻保存盒中-80℃超低温冰箱过夜，最后放入液氮中长期保存；所述冷冻液的组分为：每100ml冷冻液含有：二甲基亚砜9-11ml、Supercool X-1000 0.8-1.5 ml、胎牛血清15-20 ml、谷胱甘肽0.15-0.25g、蔗糖1-2g 和DMEM/F12液75.2-67.5ml；冷冻液经0.22微米滤膜过滤后4℃保存。

2.如权利要求1所述的一种用于细胞培养的组织块的冷冻保存方法，其特征是，

（1）在无菌超净台内首先将组织放在平皿中修剪成1.0-1.2cm³的块状，然后用PBS液彻底冲洗5-8遍，之后把组织块放在干燥的平皿内沾3-5下，让组织块稍微干燥后，放入组织匀浆机的无菌试管内，180-200转/分钟匀浆处理3-5分钟，这时组织块成乳糜状；

（2）冷冻时，先用吸管将乳糜状组织块放入离心管内，根据乳糜状组织块的体积加入8-10倍量的冷冻液混匀，然后按每管5毫升分装到冻存管中，之后放置在冷冻保存盒中-80℃超低温冰箱过夜，次日将冻存管转入液氮中长期保存。

3.一种用于细胞培养的组织块的解冻方法，其特征是，解冻时先将权利要求1或2所述的冻存管从液氮中取出，依次经过解冻液离心洗涤、培养液离心洗涤，之后组织块可直接接种培养或经蛋白酶消化成单个细胞后培养；所述解冻液的组分为：每100ml解冻液含有：胎牛血清10-15ml、谷胱甘肽0.15-0.25g、蔗糖2-3g和DMEM/F12液90-85ml，经0.22微米滤膜过滤后4℃保存。

4.如权利要求3所述的用于细胞培养的组织块的解冻方法，其特征是，解冻时，先将权利要求1或2所述的冻存管从液氮中取出，放在38-39℃水浴中溶解，用吸管吸取组织块放入离心管中，加入4-5倍量解冻液轻轻混匀后静置3-5分钟，然后离心去掉上清液，之后再加入4-5倍量培养液轻轻混匀后离心并去掉上清液，这时可将组织块直接接种到培养瓶中或经蛋白酶消化成单个细胞，加入培养液后放CO₂培养箱内培养。