[发明专利]一种猪流行性腹泻病毒株、其弱毒疫苗株及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种猪流行性腹泻病毒强毒株HN1301、由该强毒株HN1301传代致弱的弱毒疫苗株HN1302，本发明还涉及由该猪流行性腹泻病毒弱毒株HN1302制备的疫苗组合物以及该疫苗组合物的制备方法和应用，属于生物医药领域。

背景技术

猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的一种以腹泻、呕吐和脱水为主要特征的猪肠道传染病。各种年龄的猪都易感,哺乳仔猪、架子猪或育肥猪的发病率可达100%,尤其哺乳仔猪受害最严重。此病毒感染已经成为猪养殖产业发展中的一个严重问题，此病已经在全球许多国家爆发并造成了严重的经济损失。本病主要发生在冬季,夏季也可发生。我国以12月至次年2月为高发季节。PEDV为冠状病毒科(Coronviridae)冠状病毒属(Coronavirus)成员。PEDV基因组是单股正链具有感染性的RNA，全长27000～33000个核苷酸（nt），分子量为6×10⁶～8×10⁶。目前已测定了PEDV CV777株完整的基因组序列，基因组全长为28033nt。与其他冠状病毒相似，PEDV基因组5′端有一个帽子结构（cap），3′端有一个Poly(A)尾。PEDV的结构蛋白与其它冠状病毒也相似,主要有糖基化纤突蛋白即S蛋白、基化囊膜蛋白即M蛋白和RNA结合的未糖基化核衣壳蛋白即N蛋白。S蛋白在受体细胞结合吸附、膜融合等方面发挥重要作用，也是诱导机体产生保护性中和抗体的主要免疫蛋白，S蛋白的变异会改变PEDV毒株的免疫原性，从而导致现有疫苗的失效。

众所周知，病毒的基因组在其增殖过程中不是一成不变的，随时可能发生变异。近几年的一些研究表明：冠状病毒S基因的变化更能够体现病毒的变异情况，通过对各地方分离的PEDV毒株的序列分析表明，PEDV毒株S基因有部分的插入、缺失和突变；同时与现用疫苗株相比，目前流行的PEDV毒株S蛋白的抗原位点糖基化位点和跨膜螺旋均有明显改变，这提示PEDV在近年呈现快速变异和进化的趋势。通过对S基因不同功能区域的研究发现，S1区域包括了S蛋白的中和表位和受体结合域，组成了暴露在PEDV病毒粒子表面的球形胞外功能区。当PEDV感染易感动物时，S1区域激活宿主的免疫系统，不同的淋巴细胞产生针对S蛋白的特异性抗体。因此，S1蛋白在病毒感染过程中起到决定性的作用。已有文献研究表明，S1蛋白可以利用分子克隆的方法进行原核和真核表达，这为我们进一步研究提供了技术支持。

采用疫苗进行免疫预防是国内外控制猪流行性腹泻的根本手段，而市场销售的商品疫苗主要是猪流行性腹泻-猪传染性胃肠炎二联灭活苗/活苗，以及猪流行性腹泻-猪传染性胃肠炎-猪轮状病毒三联灭活苗/活苗，这些疫苗的应用对猪流行性腹泻起到了一定的预防作用。如公开号为CN101117627A的专利公开了一种猪流行性腹泻病毒弱毒疫苗株及其应用，该弱毒疫苗株与PEDV CV777株ORF3的序列同源性为97.9%，从ORF3序列的ATG开始的第245位到293位一共缺失了49个核苷酸；与PEDV Brl/87株ORF3的序列同源性为97.8%，从ORF3序列的ATG开始的第245位到293位一共缺失了49个核苷酸。此外，公开号为CN102949718A的专利公开了一种猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻和猪轮状病毒的三联疫苗、公开号为CN103041385A的专利公开了一种猪传染性胃肠炎、流行性腹泻二联活疫苗及其制备方法。

但由于目前流行的猪流行性腹泻病毒株的S基因的变异，现有的疫苗不足以对目前流行毒株产生全面的免疫保护，从而导致疫苗的免疫效果不太理想，猪流行性腹泻在中国乃至全球一些国家和地区持续爆发。因此，需要发明一种猪流行性腹泻病毒株及免疫原性物质和疫苗来解决上述问题，而且该猪流行性腹泻病毒株应该具有所有S基因突变株的共同特征，才能够在更广泛的范围内对该病起到有效的预见性防治。

发明内容

本发明提供了一种S1基因，所述S1基因实质上含有编码序列表中SEQ.NO.2所述的蛋白的核苷酸序列。

本发明提供了一种S1基因，所述S1基因实质上含有序列表中SEQ.NO.1所述的核苷酸序列。

本发明另一目的在于提供一种猪流行性腹泻病毒株，该毒株是目前猪流行性腹泻病毒的流行毒株。所述猪流行性腹泻病毒株含有编码序列表中SEQ.NO.2所述的蛋白的核苷酸序列。