[发明专利]一株鸭源H4N6亚型禽流感病毒毒株及其应用

说明书

技术领域

本发明属于动物病毒学领域，涉及一株分离的病毒新毒株及其应用，具体为一株鸭源H4N6亚型禽流感病毒毒株及其应用。

背景技术

禽流感(Avian influenza，AI)是由A型流感病毒引起的一种严重危害禽类健康的传染性疾病。禽类感染禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)后，症状可表现为非显性感染、亚临诊感染，或轻度呼吸道疾病、产蛋量降低直至急性全身致死性疾病等多种形式。AIV据其致病性可分为高致病性AIV(Highly Pathogenic Avian Influenza virus,HPAIV)和低致病性AIV(Low Pathogenic Avian Influenza virus,LPAIV)。H4亚型属于低致病性AIV，多从水禽和野鸟体内分离到，在鸭、鹅等体内持续存在，并且可能传播给鸡。尽管这些病毒对动物体多呈低致病性，但能够使产蛋量下降，从而给养禽业造成损失。早在1956年，捷克斯洛伐克就在家鸭中分离到了H4N6，1999年，Alexander首次报道从加拿大患有肺炎的猪体内分离到H4N6亚型AIV，而在俄罗斯和中国也有类似报道，表明该亚型病毒也可以在种间传播。H4亚型AIV的宿主范围比较广，包括鸡、火鸡、鸭、野鸭、鸵鸟、鹦鹉，在死海豹和病猪上也曾分离到了H4亚型AIV，说明H4亚型AIV对哺乳动物也有一定的致病性。另外，H4亚型AIV感染后，可能再次感染H5、H9或其他亚型AIV，在机体内其NA基因和内部基因可能发生复杂的基因重组，产生新型的重组病毒。因此，在AI监测中，也应该对H4亚型AIV引起高度的关注。AIV存在着广泛的抗原漂移和抗原转变现象，其抗原变异频率很高。因此，若能够对AIV进行全基因组序列测定，对于研究禽流感病毒的检测、分布、流行规律以及控制禽流感的流行、蔓延都将具有非常重大的意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对AIV存在着广泛的抗原漂移和抗原转变现象，其抗原变异频率很高的现状，而对一株鸭源H4N6亚型禽流感病毒毒株进行全基因组序列测定，并将其信息用于研究禽流感病毒的检测、分布、流行规律以及控制禽流感的流行和蔓延。本发明的H4N6亚型禽流感病毒毒株的基因组信息具有重大价值。

本发明提供的技术方案之一是：一株甲型流感病毒毒株，其保藏号为CGMCC NO.7606。

所述的甲型流感病毒毒株为鸭源H4N6亚型禽流感病毒毒株A/duck/Shanghai/Y20/06(H4N6)，在病毒HA基因切割位点附近的氨基酸序列为“PEKASR↓GLF”，为低致病力禽流感毒株特征。所述的甲型流感病毒毒株于2013年5月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，其分类命名为：甲型流感病毒，其保藏编号为CGMCC NO.7606。

所述的甲型流感病毒毒株，其PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M和NS8个基因片段的CDS序列分别如SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：8所示。其中HA和NA基因与H4N6亚型禽流感病毒处于同一分支内；而PB2、PB1、NP、PA基因与目前在我国流行的H6亚型禽流感病毒关系密切；M基因与A/environment/Korea/CSM05/2004(H3N1)处于同一分支；而NS基因与A/wild duck/Korea/YS44/2004(H1N2)同源性最高，因此，这是一株重组禽流感病毒毒株。

本发明提供的技术方案之二是：前述保藏号为CGMCC NO.7606的甲型流感病毒毒株的制备方法，其包括步骤：将保藏号为CGMCC NO.7606的甲型流感病毒毒株以0.2mL/枚的接种量接种9～10日龄的SPF鸡胚，其中所述毒株的有效剂量为10⁴～10⁵EID₅₀/mL，然后将接种后的鸡胚置于孵化器中培养48～96h并弃去24h内死亡的鸡胚，收集感染鸡胚的尿囊液即得。

本发明提供的技术方案之三是：前述保藏号为CGMCC NO.7606的甲型流感病毒毒株在制备H4N6亚型流感病毒诊断试剂中的应用。

本发明提供的技术方案之四是：前述保藏号为CGMCC NO.7606的甲型流感病毒毒株在制备H4亚型禽流感病毒疫苗中的应用。