[发明专利]一种中国被毛孢菌种的液体分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种微生物的分离方法，特别涉及一种中国被毛孢菌种的液体分离方法。

背景技术

冬虫夏草是鳞翅目蝙蝠蛾属的虫草蝙蝠蛾(Hepialus armoricamus Oberthur)幼虫感染中国被毛孢真菌后，在体内大量繁殖形成的虫菌复合体。中国专利CN102283022A公开的冬虫夏草菌无性阶段菌种分离的方法。上述专利从感染中国被毛孢的蝙蝠蛾幼虫活体的体液中分离中国被毛孢无性阶段菌种的方法；其缺点是收集中国被毛孢感染的蝙蝠蛾幼虫难度大，时间长，分离的菌种必须通过驯化、复壮后才能用于大规模生产。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种不同以往的中国被毛孢菌种分离的新方法。

本发明的技术解决方案是通过以下方法来实现的，其特点是包括如下步骤：

步骤一：将新鲜天然冬虫夏草去除外部菌套，刷去虫草表面杂质，用消毒液进行消毒，灭菌水清洗1～4次，切除虫草表皮组织，切块，大小在1～4mm³，备用；

步骤二：将禽蛋去壳，用细菌过滤器过滤，置入灭菌后的培养容器，培养液占培养容器体积的1/10～9/10，接入1～5块切好的虫草块，在0～18℃，转速60～180r/min摇床培养1～15天，即在培养容器的壁上长满菌丝及过滤液中形成菌球；进行菌检，分离得到的中国被毛孢菌种可直接用于固体或液体发酵生产。

本发明的另一特点是步骤一中所述的消毒液为次氯酸钠消毒液。

本发明的另一特点是步骤一中所述的消毒液为氯化汞。

本发明的另一特点是步骤一中所述的消毒液为乙醇。

本发明的另一特点是步骤一中所述的消毒液为双氧水.

本发明的另一特点是步骤二中所述的禽蛋为鸡蛋。

本发明的另一特点是步骤二中所述的禽蛋为鸭蛋。

本发明的另一特点是步骤二中所述的禽蛋为鹌鹑蛋。

本发明的另一特点是步骤二中所述的禽蛋为鹅蛋。

本发明的另一特点是步骤二中所述的禽蛋为鸵鸟蛋。

本发明的效果是：1、材料容易得到，成本低。2、菌种培养时间短，无需纯化、复壮可直接用于生产。3、菌种生长旺盛，获得菌种多，培养基简单。

具体实施方式

实施例1

步骤一：将新鲜的天然冬虫夏草去除外部菌套，刷去虫草表面杂质，用5％次氯酸钠消毒15秒，灭菌水清洗4次，然后切除虫草表皮组织，切块，大小在4mm³，备用；

步骤二：将鸡蛋去壳，用细菌过滤器过滤，置入灭菌后的培养容器，过滤液占培养容器体积的3/10，接入2块4mm³大小的虫草块，在4℃、转速180r/min的摇床内培养4天，在培养容器的过滤液中形成菌球及容器壁上长满菌丝；菌检后即得中国被毛孢菌种。

实施例2

步骤一：将新鲜的天然冬虫夏草去除外部菌套，刷去虫草表面杂质，用2‰氯化汞消毒7秒，灭菌水清洗3次，然后切除虫草表皮组织，切块，大小在3mm³，备用；

步骤二：将鸭蛋去壳，用细菌过滤器过滤，置入灭菌后的培养容器，过滤液占培养容器体积的5/10，接入2块3mm³大小的虫草块，在18℃、转速180r/min的摇床内培养4天，在培养容器的过滤液中形成菌球及容器壁上长满菌丝；菌检后即得中国被毛孢菌种。

实施例3

步骤一：将新鲜的天然冬虫夏草去除外部菌套，刷去虫草表面杂质，75％乙醇消毒11秒，灭菌水清洗2次，然后切除虫草表皮组织，切块，大小在1mm³，备用；

步骤二：将鹅蛋去壳，用细菌过滤器过滤，置入灭菌后的培养容器，过滤液占培养容器体积的7/10，接入4块1mm³大小的虫草菌块，在8℃、转速80r/min的摇床内培养10天，在培养容器的过滤液中形成菌球及容器壁上长满菌丝；菌检后即得中国被毛孢菌种。

实施例4

步骤一：将新鲜的天然冬虫夏草去除外部菌套，刷去虫草表面杂质，用3％双氧水消毒10秒，灭菌水清洗1次，然后切除虫草表皮组织，切块，大小在3mm³，备用；

步骤二：将鸵鸟蛋去壳，用细菌过滤器过滤，置入灭菌后的培养容器，过滤液占培养容器体积的9/10，接入5块3mm³大小的虫草块，在0℃、转速180r/min的摇床内培养15天，在培养容器的过滤液中形成菌球及容器壁上长满菌丝；菌检后即得中国被毛孢菌种。

实施例5