[发明专利]高蛋白沙漠绿藻的工业化培养方法

权利要求书

1.一种高蛋白沙漠绿藻的工业化培养方法，其特征在于按下述步骤进行：第一步，分离，称取沙漠土壤样品，按每50g至100g沙漠土壤样品中加入200ml至400ml的TAP液体培养基计，向沙漠土壤样品中加入TAP液体培养基，在转速为100rpm至120rpm条件下用摇床摇5 min 至15min，使样品与培养基充分混合，将混合物在温度为25℃至31℃、光照为2000Lux至3000Lux条件下培养3天至15天，等培养物上清液变绿后，按每200μL至300μL上清液涂布在25ml至30ml TAP固体培养基上计，在无菌条件下吸取上清液，涂布在含有TAP固体培养基的培养皿中，并在温度为25℃至31℃、光照为2000Lux至3000Lux条件下培养3天至15天得到沙漠绿藻培养物；

第二步，纯化，按每单个沙漠绿藻落接种在25ml至30mlTAP固体培养基上计，用已灭过菌的接种环在沙漠绿藻培养物中挑取单个沙漠绿藻落，划线法接种在含有TAP固体培养基的固体平板上，在温度为25℃至31℃、光照为2000Lux至3000Lux条件下培养3天至15天得到一代沙漠绿藻藻体，再用已灭过菌的接种环在一代沙漠绿藻藻体中挑取单个沙漠绿藻落接种在含有新的TAP固体培养基的固体平板上，在温度为25℃至31℃、光照为2000Lux至3000Lux条件下培养3天至15天得到二代沙漠绿藻藻体，重复直至接种8代至10代，最后得到纯沙漠绿藻藻体；

第三步，工业化培养，按每个单藻落接种到100ml至500ml TAP液体培养基上计，在纯沙漠绿藻藻体中挑取单藻落，接种到TAP液体培养基中，在温度为25℃至31℃、光照为2000 Lux至4000 Lux条件下进行密闭培养3天至15天制备得到生物量达到10¹¹个细胞/ml至10¹²个细胞/ml的沙漠绿藻母种子悬浮液，按每50L至500L TAP液体培养基中接入1%至3%体积的沙漠绿藻母种子悬浮液计，向新的TAP液体培养基中接入沙漠绿藻母种子悬浮液，在温度为25℃至31℃、光照为2000Lux至4000Lux条件下进行工业化密闭培养3天至15天。

2.根据权利要求1所述的高蛋白沙漠绿藻的工业化培养方法，其特征在于TAP液体培养基为0.4gNH₄Cl、0.156gMgSO₄、0.05gCaCl₂·H₂O、0.142gK₂HPO·3H₂O、2.42gTris Base、1.5mlHCl、1.0ml冰乙酸、2g CH₃COONa·3H₂O和1ml微量元素溶于水配制成1L的溶液得到TAP液体培养基，该TAP液体培养基的PH范围为6.8至7.0。

3.根据权利要求1或2所述的高蛋白沙漠绿藻的工业化培养方法，其特征在于TAP固体培养基按下述方法得到：将0.4gNH₄Cl、0.156gMgSO₄、0.05gCaCl₂·H₂O、0.142gK₂HPO·3H₂O、2.42gTris Base、1.5mlHCl、1.0ml冰乙酸、2g CH₃COONa·3H₂O和1ml微量元素溶于水配制成1L的溶液，向该溶液中加入溶液总体积1.8%至2%的琼脂粉，并将该溶液的PH范围调节到6.8至7.0，将该溶液在温度为121℃、压力为0.11MPa进行高压湿热灭菌20min后，在40℃下冷却并凝固，使其成为固体状态即得到TAP固体培养基。

4.根据权利要求1或2所述的高蛋白沙漠绿藻的工业化培养方法，其特征在于沙漠土壤样品为塔克拉玛干沙漠中采集过来的沙漠土壤样品。

5.根据权利要求3所述的高蛋白沙漠绿藻的工业化培养方法，其特征在于沙漠土壤样品为塔克拉玛干沙漠中采集过来的沙漠土壤样品。