[发明专利]人卵透明带蛋白4中的表位肽及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物工程和免疫学技术领域，具体地，涉及一组人卵透明带蛋白4中的表位肽及其应用。

背景技术

ZP蛋白(人卵透明带蛋白)，包括组成蛋白之一的ZP4蛋白，在精卵受精过程中也起者重要的作用，是精子第二受体。在正常妇女血清中抗ZP抗体一般为阴性，而抗ZP抗体的存在会结合ZP蛋白，使精子的运动能力下降，影响精子穿过宫颈粘液及上行，并影响精子和ZP蛋白的结合，从而阻止精卵结合并导致不孕。在发生ZP自身免疫的不孕症妇女中，血清中存在抗ZP蛋白抗体，但由于ZP蛋白抗原的不可获得性，现有一般检测抗原多用与人ZP具交叉反应性的猪ZP蛋白，故目前对抗人ZP抗体的检测存在较高的假阳性率。

而在转化医学领域，建立特异、灵敏的疾病诊断方法一直是重要研究方向之一。在一般用18或20聚长表位肽抗原的酶联免疫测定法(ELISA)诊断自身免疫疾病以及诸如流感病毒感染的场合，往往出现30%左右的假阳性率，从而影响临床诊断的准确性和所建立诊断方法的广泛应用。

造成此种场合高假阳性率的原因很简单，即：由于已清楚线性表位由3-8个氨基酸残基组成，18或20聚或更长的合成肽(太短不易作为抗原包被ELISA检测板)中显然有可能存在N个不被知晓的表位，以及由于病毒和细菌自然感染(如流感病毒感染等)和自身免疫疾病等诸多原因导致人体内通常存在成千上万种但抗体滴度不高的抗体，因此这两个因素在以上患者血清稀释度不可能高(一般1:20-1:100)的情况下，极易产生非特异性交叉反应，从而导致高假阳性率检测结果。

另外，基于一旦发生人ZP自身免疫疾病，暴露在ZP蛋白表面的抗原表位都会产生它们的抗体这一认知，因此解码靶蛋白的线性抗原表位组显得尤为重要，因为如此就能知晓人ZP可诱发多少和哪些ZP表位抗体，进而据此构建可替代天然ZP蛋白(由ZP1-ZP4四个蛋白组成)重组多表位肽抗原，以解决ZP抗体检测的抗原来源和检测ZP抗体的特异性和灵敏度等问题，也包括为研制安全可逆和有效的人ZP避孕疫苗提供尽可能多的线性抗原表位肽。

发明内容

本发明提供了一组可联合应用于检测抗人ZP4蛋白抗体，从而诊断妇女ZP自身免疫不孕病因的ZP4蛋白小分子表位肽，本发明还提供了该组表位肽在制备避孕疫苗中的应用。

本发明第一方面，提供了一种来自人卵透明带蛋白-4(人ZP4蛋白)227位-463位的分离的短肽，所述短肽的结构如式I所示：

X1-X-X2

式I，

并满足以下特征：

(a)式I中X为6-7个氨基酸的核心片段；

(b)式I中X1、X2为无、1或2个氨基酸，且X1和X2氨基酸个数总和≤2；

(c)所述的核心片段的序列选自SEQ ID NO.:1-6；和

(d)所述的短肽具有与抗人ZP4C抗体结合的活性；

其中，“-”表示肽键或肽接头。

在另一优选例中，所述的短肽选自如SEQ ID NO.:7-18所示的短肽。

本发明第二方面，提供了一种多肽，所述多肽是经本发明第一方面所述的短肽经过1-3个氨基酸的添加、1-2个缺失并仍含有所述核心片段X，且具有与抗人ZP4C抗体结合活性的多肽。

本发明的第三方面，提供了一种分离的肽集合，所述的肽集合由选自下组的肽或多肽构成：(i)一种或多种选自本发明第一方面所述的短肽；和/或(ii)一种或多种选自本发明第一方面所述的多肽。

在另一优选例中，(i)中所述短肽与(ii)中所述多肽的核心片段X的序列可以相同或不相同。

在另一优选例中，(i)中所述各短肽的核心片段X的序列可以相同或不相同。

在另一优选例中，(ii)中所述各多肽的核心片段X的序列可以相同或不相同。

在另一优选例中，所述的肽集合还包括除SEQ ID NO.:1-6以外的分离的人ZP4蛋白线性表位肽。

本发明第四方面，提供了本发明第三方面所述肽集合的用途，用于制备检测抗人ZP4蛋白抗体的试剂或试剂盒，其中，所述的试剂或试剂盒用于诊断是否由ZP自身免疫导致的妇女不孕。

在另一优选例中，所述的试剂点样于试剂盒检测板中。

在另一优选例中，所述的试剂包括肽集合或偶联于载体蛋白的肽集合。

在另一优选例中，所述的载体蛋白包括GST蛋白。

在另一优选例中，所述的检测包括酶联免疫反应法(ELISA法)检测。