[发明专利]一种以鲜活大青叶为原料制备靛玉红的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药材活性成分的制备、提取方法，更具体的说涉及一种以鲜活大青叶为原料制备靛玉红的方法。

技术背景

大青叶是我国的传统中药，为十字花科植物菘蓝Isatis indigotica Fortune的干燥叶，同时商品中也常采用蓼科植物蓼大青Polygonum tinctirium Lour；爵床科植物马蓝Baphicacanthus cusia fNees)Bremek.和马鞭草科植物路边青Clerodendron cyrtophyllum Turcz.作为大青叶的代用品。菘蓝的根和叶，具有清热解毒、凉血、消斑的功效，主治温病发热、发斑、发疹、风热感冒、咽喉肿痛、流行性脑脊髓膜炎、乙型脑炎、肝炎、腮腺炎、丹毒、痛肿等症，是治疗感冒常用的大宗药材。大青叶(菘蓝叶)中的主要成分有菘蓝苷（isatan B）、菘蓝苷易水解为靛玉红（indirubin）和靛蓝（indigo），色胺酮（trptanthrin）、β-谷留醇、二十九烷、苯甲酸、临位氨基苯甲酸、在大青叶的全株中还含有芥苷（glucobrassicin）、新芥苷（neoglucobrassicin）、1-磺基苷（1-sulpho-3-indolylmethyl glucosinolate）、吲哚醇、1-硫氰酸-2-羟基-3丁烯（1-thiocy a no-2-hydroxy-3-butene）、腺苷（adenosine）、棕榈酸、γ-谷甾醇等，天门冬氨酸、苏氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸及高含量的铁和锰。据报道，在大青叶的四个品种中都含有靛蓝、靛玉红，其中，菘蓝叶中菘蓝苷B(isatanB，有的也称大黄素B和靛红烷B)含量最高，据报道最高含量达到1%。

靛玉红又名炮弹树碱B，分子量为：262.26；分子结构式为：

靛玉红为一种双吲哚类生物碱；对多种移植性动物肿瘤有抑制作用，能破坏白血病细胞；在其作用下，变性的细胞多呈肿胀、溶解性坏死。实验研究发现，靛玉红还能增强动物的单核巨噬细胞系统的吞噬能力，靛玉红为我国首创的新型结构的抗白血病药物。目前国内用于研究的靛玉红有3中来源：即从中药大青叶、青黛中提取的天然产物，半合成、全合成的靛玉红。

发明内容

为了提高从大青叶（菘蓝）中提取靛玉红的收率，本发明提供了一种在大青叶鲜品原料中直接半合成靛玉红的方法；同时在提取时将菘蓝原药材中已经存在的靛玉红一并提取出来方法。

本发明中将菘蓝苷（靛红烷B）转化为靛玉红的原理是：

1）菘蓝苷在加热条件下的不稳定性；

2）菘蓝苷属于酯类。在碱性条件下容易水解；

3）游离出来的吲哚酚阳离子在厌氧条件下不会氧化为吲哚酚自由基；

在上述原理的基础上，本发明直接在粉碎鲜活大青叶菘蓝原料原料中添加吲哚醌，使吲哚酚和吲哚醌反应缩合成为靛玉红。化学反应方程式如下：

但是本反应存在一个副反应，因为靛红烷B属于酯类，碱性条件下易水解。其在内源酶的作用下发生水解反应，生产吲哚酚阳离子，在有氧的条件下，吲哚酚阳离子会氧化为吲哚酚自由基，吲哚酚自由基的生成由原浸泡液中的溶解氧供氧即可，吲哚酚自由基可能缩合成为靛蓝；但是进一步氧化生成的吲哚满二酮则需要外界额外供氧。化学反应方程式如下：

因此，体系pH的控制与酶解时通氧与否是使反应生成何种靛的关键。若使产靛向着靛玉红方向进行，则在酶解过程中，通过通氧气、调高pH等手段促进吲哚满二酮的生成，若向着靛蓝方向进行，则应在酶解过程中控制氧气含量和体系pH，防止吲哚满二酮的生成，故体系含氧量和pH与生成何种靛密切相关。

以鲜活大青叶为原料制备靛玉红的方法的具体内容是：

1）采收12ｈ内的鲜活大青叶中添加药材重量2-5倍的水，粉碎，粉碎的浆液能过目筛，制备得到提取原浆；

2）在提取原浆中添加如吲哚醌，充分搅拌，调pH值大于7，所述的调pH值大于7为向反应液中添加石灰水；加热，反应大于30min后，过滤，收集水液，在该步骤中可以向原浆中充入惰性气体，排除其中的氧气；

3）用氯仿、一氯甲烷、二氯甲烷、四氯甲烷或乙酸乙酯中的一种或几种的混合物，加热，萃取水液，收集合并有机相；

4）回收有机相，上氧化铝柱，洗脱，纯化得到靛玉红粗品。所述的上氧化铝柱，洗脱为：