[发明专利]一种用于检测样品中重金属离子锌离子含量的酶联免疫试剂盒

说明书

技术领域：

本发明涉及一种用于检测重金属离子锌离子的单克隆抗体及酶联免疫试剂盒。

背景技术：

土壤和农产品中的重金属与人类健康密切相关。重金属污染主要指生物毒性显著地汞、铬、镉、铅以及类金属砷，还包括具有毒性的重金属铜、钴、镍、锡等污染物。随着城市的扩大和大规模工业的发展，大量重金属进入环境后，即使浓度很低，也可能造成危害，通过饮用水，或者通过生物富集以及食物链等方式最终威胁人体健康。重金属污染不同于其他类型污染，具有隐蔽性、长期性和不可逆转性等特点。

在当代人类使用的金属中，按金属用量计，锌(Zn)是仅次于铁、铝、铜之后的第四大用量的重金属。锌是维持机体正常生长发育，新陈代谢的重要物质，它参与蛋白质合成，促进细胞分裂、生长和再生。锌参与体内200多种酶的合成和活化，是动物生长发育及维持正常生理机能所必须的微量元素，但环境污染和饲料、药物添加剂的滥用，造成畜禽产品重金属残留不同程度超标。摄入过量的锌会导致机体代谢紊乱；过量的锌是一种作用迅速的中枢神经毒素，通过对神经细胞的直接损害及对体内各种物质的拮抗而影响脑功能；高锌还可明显抑制红细胞的免疫功能，造成雏鸡肝、脾的结构和功能受损；许多实验和流行病学调查已经证实，如果锌在体内含量过高，将会抑制噬细胞的活性和杀菌力，降低人体免疫功能，使抵抗力减弱，对疾病易性增加。日粮锌添加1300mg／kg以上时，会导致雏鸭患白肌病，肌胃、小肠平滑肌、骨骼肌和心肌受损，作物中蓄积的重金属离子通过食物链的生物放大作用进入人畜体内，引起多种疾病甚至癌症，而且危害还可以遗传到下一代，威胁人畜健康。

同时，水和土壤的锌(Zn)污染已经引起环境科学工作者的广泛关注，锌主要来源于采矿、电镀和冶炼行业污染物的排放。土壤中Zn超过200mg／kg时可能对植物生长造成危害，过量Zn可以直接导致植物发生Zn污染中毒，也可以间接影响植物对于重要营养元素Fe的吸收，进而致使植物因Fe缺失而失绿、生长障碍、甚至死亡。在重金属污染的预防和治理中，重金属污染物的监测和识别至关重要。

因此，痕量重金属的定量分析在食品和环境检测等方面都是非常重要的。传统的重金属离子检测法如无火焰原子吸收光谱法、火焰原子吸收光谱法、电感耦合等离子体质谱法、伏安法和离子色谱法，以及电热原子化原子吸收光谱法等，检测必须在具备大型分析仪器的重点实验室内进行，无法用于现场检测，且受到费用高、处理量有限和检测时间长等限制，都不利于在生产中推广应用，难以适应环境及市场产品的现场抽查及产品进出口快速通关的要求；免疫学检测方法具有快速、廉价、灵敏和特异性强的优点，可同时完成高通量样品的检测，建立免疫分析法检测锌离子是生产及经济发展的需要。

因此，锌离子污染已对人类健康构成了严重威胁，建立快速、简便、敏感、特异、经济、筛检量大的离子锌离子免疫检测技术，对于减少环境污染、提高食品质量、保障食品安全具有重要意义。

发明内容：

本发明的目的：针对现有检测技术的不足和缺陷，制备出抗锌离子螯合物的高亲和力、特异性的多克隆抗体和单克隆抗体，以此为基础提供一种用于检测锌离子含量的酶联免疫试剂盒，能够快速、简便、敏感、特异的检测食品、茶叶、饲料、饮料、土壤、水、动物组织等样品中的锌离子的含量。

所述的检测锌离子的酶联免疫试剂盒，包括96孔或48孔酶标板、最佳工作浓度的Zn²⁺mAb或pAb、最佳工作浓度的RaMIgG-HRP或GaMIgG-HRP、底物显色剂A、底物显色剂B、Zn²⁺-DTPA-OVA或Zn²⁺-DTPA-BSA包被并封闭好的酶标板、终止液，Zn²⁺螯合物配置的标准品稀释液1～9，洗液(PBST)。

所述的检测锌离子的酶联免疫试剂盒，用眼观或酶标仪获取结果，并根据结果绘制标准曲线，添加回归方程式，根据回归方程式分析计算所检测样品中的锌离子含量，对锌离子进行痕量分析。

所述的检测锌离子的酶联免疫试剂盒，所用的锌离子标准品为锌离子与EDTA的螯合物，螯合物中锌离子含量采用石墨炉原子吸收光谱法检测获得螯合物半抗原中Zn的含量。

所述单克隆抗体或多克隆抗体的制备方法为：