[发明专利]一种植物促根剂

说明书

技术领域

一种植物根系促生剂。该产品属于生物化工领域。通过香菇菌丝深层培养生产的香菇多糖能有效地促进植物根系的旺盛生长，并且不受其高浓度的抑制，明显优于其他植物激素或生长调节剂。可以广泛应用于农林、食品和环境等领域的植物促根生长。

背景技术

香菇多糖对动植物具有多种有益的作用，一般采用从子实体中提取，生长周期长、分离成本高。采用耐酸菌丝实施深层开放式培养可大规模生产香菇多糖；低成本的优势使香菇多糖在农业等领域的使用成为可能。植物根系是植物生长的关键器官，促进根系生长一直采用耕作措施是施肥和使用植物生长调节剂等。

发明内容

制备香菇耐酸突变体的菌丝种子液；发酵培养香菇菌丝，生产培养物；沉淀或离心培养物，获取上清液；从上清液中分离香菇多糖；测定糖的组成、结构等；使用质量百分比为0.000001％-100％含量的香菇多糖(包括中性多糖和酸性多糖)，通过喷洒、涂抹、浸泡等手段或添加为包衣成分等处理植物根、茎、叶或种子，均取得了对植物根系具有促生作用的良好效果。该根系促生剂为食用香菇的发酵产品，对动植物安全可靠；它能有效促进植物根系的旺盛生长，而对植物的其他器官影响较小，并且不受该物质高浓度的抑制，明显优于其他植物激素或生长调节剂。该产品可以广泛应用于农林、食品和环境等领域。

具体实施方式

1制备香菇耐酸突变体的菌丝种子液。

(1)菌种活化

将保存于试管斜面培养基上的香菇菌种用接种铲切出0.5cm×0.5cm大小的菌块接种于倒平板的PDA培养基上，25℃恒温培养6d。

(2)培养菌丝的液体种子

将已活化的斜面菌种切割成0.5cm×0.5cm大小菌块，接种于液体种子培养基中，每个250mL三角瓶接5块菌块，10个大小均一的玻璃珠，培养基装液量100mL，于25℃，150r／min培养6d，制备成发酵种子液。

(3)确定培养基中分泌胞外多糖的MgSO₄与KH₂PO₄配比

在加入MgSO₄与KH₂PO₄不同配比的培养基中摇瓶培养(表1)；培养液在25℃静置24h后，用匀浆器将其匀浆。250 mL三角瓶装培养基100mL，液体菌种接种量为10％，于25℃，150r／min培养12d。MgSO₄与KH₂PO₄不同配比的培养实验结果见表1，有表可知，第四组(MgSO₄与KH₂PO₄分别为4.0和2.0g/L)效果较好，如下实验均采用这一比例。

表1无机盐组成对香菇菌丝生物量及胞外多糖产量的影响

2发酵培养香菇菌丝，获取大量培养物

在优化后的培养基和培养条件下，发酵池或发酵罐中培养香菇菌丝。定期取样、分离发酵培养物，测定菌丝的生物量(干重)和发酵滤液的胞外香菇多糖含量，结果见表1。由表可知，菌丝在培养12天是菌丝生物量和胞外多糖均达到峰值，可以终止发酵。

表2发酵液中菌丝生物量和胞外香菇多糖的含量变化

3沉淀或离心培养物，获取上清液

通过沉淀或离心手段收获发酵物中上清液；在低温、避光条件下可浓缩上清液；贮藏或直接用于香菇多糖的分离。

4分离中性香菇多糖，测定糖组成、结构等

1)粗多糖纯化工艺流程：

发酵液热水浸提→香菇粗多糖→Sevag法脱蛋白→H₂O₂脱色→透析脱盐→DEAE-纤维素(DEAE-52)柱层析→Sephadex G-100柱层析→纯多糖(中性多糖、酸性多糖)。

2)具体过程为：

a.脱蛋白：采用Sevag法，用蒸馏水将粗多糖溶解(100mL)，去除不溶部分，可溶部分加入Sevag试剂(样品：Sevag为2：1；氯仿：正丁醇为4：1)，磁力搅拌器搅拌30min，4000r/min离心5min，转移至分液漏斗静置10min，待其分层后，去除有机层与两层间的蛋白质层。同法重复几次直至有机层没有白色絮状沉淀为止。

b.脱色：采用30％H₂O₂脱色，多糖溶液在pH=8下滴加H₂O₂至淡黄色或无色，在50℃下保温2h。