[发明专利]水稻OsXrn4基因及其应用

权利要求书

1.水稻OsXrn4基因，其特征在于：该基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示。

2.包含权利要求1所述的基因的植物表达载体。

3.宿主细胞，其特征在于：该宿主细胞由权利要求2所述的植物表达载体转化。

4.根据权利要求3所述的宿主细胞，其特征在于：转化菌株为农杆菌菌株EHA105。

5.植物受体细胞或组织，其特征在于：该植物受体细胞或组织采用权利要求3或4所述的宿主细胞转化获得。

6.根据权利要求1所述的水稻OsXrn4基因的用途，其特征在于：该基因用于制备转基因抗病毒植物体。

7.根据权利要求6所述的水稻OsXrn4基因的用途，其特征在于：该基因用于制备抗水稻条纹叶枯病毒（Rice stripe virus）的水稻或抗烟草花叶病毒（Tobacco Mosaic Virus）的烟草。

8.一种采用权利要求1所述的水稻OsXrn4基因制备重组农杆菌的方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：

1）水稻OsXrn4基因的克隆

通过与已报道的拟南芥的AtXrn4序列进行Blast分析，获得水稻OsXrn4基因序列，同源性达95%以上，以此序列设计引物，获取基因全长，水稻OsXrn4基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示；引物序列如下：

RXRN4 f:  5’-CCGAGACTCCGAGAGAGATTAG-3’，

RXRN4 r:  5’-GCTTACACATTTACAATGGCCG-3’；

2）载体构建

分析全序列水稻OsXrn4基因酶切位点及双元表达载体pCV-GFP-2N的多克隆位点，设计引物，构建载体；引物序列如下：

RX1f: 5’-TCTAGAATGGGAGTCCCGGCGTTCTACC-3’，

RX1r: 5’-TCTAGACCTCTGCTGATTCAT-3’，

RX3f: 5’-GGATCCTAGGATGGCCATGGATA-3’，

RX3r: 5’-GAGCTCTCACTCACTCAGGCCATTGG-3’；

3）转化农杆菌

取-70 ℃保存的EHA105农杆菌感受态，置冰上融解；取1μl抽纯OsXrn4-Pcv-2N质粒加入到100 μl感受态中，混匀，加入到处理好的电击杯；设置2.2V电压，电击转化；点击完成加入900 μl的YEP液体培养基；28 ℃，200 rpm摇床培养2 h，菌液涂布在含50 μg/ml卡那霉素和100 μg/ml利福平平板上，28 ℃培养至形成单菌落。

9.一种抗水稻条纹叶枯病毒（Rice stripe virus）的水稻的制备方法，其特征在于该方法采用利要求3所述的宿主细胞对水稻成熟胚进行的遗传转化获得。

10.一种抗烟草花叶病毒（Tobacco Mosaic Virus）的烟草的制备方法，其特征在于该方法采用利要求3所述的宿主细胞对烟草叶盘法进行遗传转化获得。