[发明专利]一株丁香假单胞菌及其在番茄灰霉病防治中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株丁香假单胞菌，尤其涉及该菌株在番茄灰霉病防治中的应用，属于生物技术领域。 

背景技术

番茄灰霉病是一种常见且危害较重的真菌病害，除危害番茄外，还可危害茄子、辣椒、黄瓜等20多种作物。低温、连续阴雨天气多的年份危害严重，发病严重时造成茎叶枯死和大量的烂花、烂果，直接影响产量。目前常用的防治措施就是摘取老叶，加大通风，降低空气湿度。药物方面主要是利用万霉灵粉剂、百菌清烟剂熏棚或是用甲霜灵可湿性粉，但是无论用哪种方法其治愈效果都不理想。为了寻求安全有效的防治措施，人们越来越关注生物防治。生物防治是利用一种或多种生物（除人类外）或其代谢产物来降低植物病原物的数量或抑制其致病能力而减轻植物病害的一类措施。与传统的防治技术相比，生物防治技术具有不污染环境、对人和其他生物安全、防治作用持久、产品无残留、对病虫的杀伤特异性强，易于同其他植物保护措施协调配合并能节约能源等优点，必将在有害生物综合防治中发挥着越来越重要的作用。到目前为止，真菌、酵母菌、细菌、放线菌都可用于生物防治。例如：利用稻黑孢菌46和链格孢菌的代谢产物进行生物防治。利用细菌制约有害微生物是开发、利用微生物资源的重要研究领域之一，也是植物病害防治中最具有潜力、应用前景最为广阔的有效途径之一。其主要优势在于：繁殖速度快、对病原菌的作用方式较广、培养成本低廉，而且在培养时还会产生很多的抗菌物质，如细菌素、抗生素、胞外裂解酶、脂肽类等多种形式，有些细菌不仅能防治病害而且可以增加作物产量。 

近年来，国内外的许多学者都在利用有益的微生物或其代谢产物来抑制病原微生物，使生物防治发展迅速，其中假单胞菌在植物病害防治中起到了非常重要的作用。非致病假单胞菌活跃于植物根际，属于植物根际促生菌一类，植物根际假单胞菌已被应用在谷物种子或土壤中以抑制谷物病原菌的生长。非致病假单胞菌生物防 治作用主要通过根际营养竞争、分泌降解微生物的酶及抗生作用等实现。分离自小麦全蚀病自然衰退土壤的荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)2P24能产生多种抗菌物质，可以有效防治多种植物病原真菌、细菌引起的土传病害。随着人们对环境保护意识的增强，对绿色食品需求的增加，利用微生物代谢产物替代化学药物防治农作物病虫害将是今后农业发展的重点，它必将有力地推进生防事业的发展，造福人类。 

发明内容

本发明针对番茄灰霉的生物防治问题，提供了一种丁香假单胞菌（Pseudomonas syringae）ZY-1，及利用该菌株发酵培养液防治植物灰霉病害的方法。 

本发明丁香假单胞菌的分离、筛选与鉴定： 

1、从黑龙江伊春五营森林公园土壤样品中分离、纯化后获得一株具有抗真菌活性的细菌；经微生物分类学鉴定为丁香假单胞菌（Pseudomonas sp.），命名为丁香假单胞菌（Pseudomonas sp.）ZY-1。所述菌株微生物保藏号为：CGMCC No.7906，保藏日期2013年07月10号，其分类命名为：假单胞菌科假单胞菌属丁香假单胞菌Pseudomonas sp.，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。 

2、本发明所述丁香假单胞菌（Pseudomonas syringae）的分离和纯化 

（1）菌株的分离：将10g土壤样品加入到90ml无菌水中，用10倍稀释法分别配置10^-5、10^-6、10^-7g/ml的土壤悬液，分别涂布到分离培养基（分离培养基即为LB固体培养基）上，32℃培养2天，观察出现抑菌圈的菌落，测定溶真菌圈直径(D)、菌落直径(d)，根据能否产生溶菌圈与D/d值大小来初步确定菌株的抑菌能力，将D/d≥1.5的菌株在LB培养基上划线纯化、32℃培养1天； 

（2）菌株的纯化：接种环挑取上述分离菌株培养物，划线接种到LB固体培养基平板上，32℃培养，待出现单菌落后，重复上述操作2-3次，直到出现单菌落。将单菌落培养物接种至无菌LB试管斜面培养基，32℃培养1天后，于4℃下保存备用。 

3、本发明所述丁香假单胞菌（Pseudomonas syringae）的分离和纯化后经鉴定， 具有如下生物学特征：