[发明专利]鱼源抗冻多肽酸性蛋白酶制备方法及抗冻多肽的应用有效
| 申请号： | 201310441151.6 | 申请日： | 2013-09-25 |
| 公开（公告）号： | CN103468776A | 公开（公告）日： | 2013-12-25 |
| 发明（设计）人： | 汪少芸;吴晓苹;饶平凡 | 申请（专利权）人： | 福州大学 |
| 主分类号： | C12P21/06 | 分类号： | C12P21/06;C07K14/46;C07K1/20;C07K1/16;C07K1/18;A01N1/02 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350108 福建省福州市*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鱼源抗冻 多肽 酸性 蛋白酶 制备 方法 应用 | ||
1.一种鱼源抗冻多肽酸性蛋白酶制备方法，其特征在于：以包括来自鱼皮、鱼鳞的鱼源胶原蛋白为原料，采用酸性蛋白酶对其进行酶解，分离纯化、冷冻干燥得到抗冻多肽。
2.如权利要求1所述的的鱼源抗冻多肽酸性蛋白酶制备方法，其特征在于：所述的酶解条件为：pH为5.4、温度是37℃、酶解时间为30分钟、酶-底物配比为1:15（w/w）。
3.如权利要求1所述的的鱼源抗冻多肽酸性蛋白酶制备方法，其特征在于：所述的分离纯化的具体步骤为：酶解产物首先利用Sephadex G-50凝胶色谱进行分离，洗脱液为去离子水，流速为2mL/min，洗脱峰在225nm下进行测量；收集具有最佳抗冻活性的峰，再用Sulfopropyl-Sepadex C-25阳离子交换色谱进行分离，洗脱液为NaCl浓度梯度为0-0.5 M的0.01mol/L pH7.0的磷酸缓冲液，流速为0.5mL/min；收集具有最佳抗冻活性的峰，利用RP-HPLC反相高效液相色谱再进行进一步的分离，反相HPLC的分离条件是用10%-90% （v/v）乙腈溶液作为洗脱液梯度洗脱，流速为1mL/min，收集25%乙腈和75%水（v/v）处的洗脱峰,得到抗冻多肽。
4.如权利要求3所述的的鱼源抗冻多肽酸性蛋白酶制备方法，其特征在于：所述的抗冻多肽的氨基酸序列为：pmgprgppgppgtpgpqgftgpp。
5.一种如权利要求1所述方法制备的抗冻多肽的应用，其特征在于：抗冻多肽可作为低温环境下减少细胞损伤的保护剂。
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