[发明专利]负载细胞外全基质的壳聚糖/纳米羟基磷灰石缓释微球及其制备方法

说明书

技术领域

本申请涉及一种负载细胞外全基质的/壳聚糖/纳米羟基磷灰石缓释微球及其制备方法。

背景技术

很多异种细胞外基质材料已经应用于临床治疗中，比如：异种心脏瓣膜、小肠黏膜下层、膀胱基质等。骨组织工程中非常有潜力的修复材料是细胞外基质，经研究猪膀胱源性的细胞外全基质具有非常高的进化保守性，其成份主要包括：胶原(I、III和Ⅳ-Ⅶ)、糖蛋白(纤连蛋白、层粘连蛋白)、糖胺多糖和各种生长因子(包括TGF-β、b-FGF、VEGF等)，从仿生学角度看该细胞外全基质更接近细胞生长所需的天然微环境状态，可以作为骨组织工程的细胞外基质材料。

骨组织由24％的有机成份和75％的无机成份组成，无机成份则主要是羟基磷灰石。纳米羟基磷灰石具有更好的理化性能和生物学效应，比如比表面积大、生物活性度高、吸附能力强、生物相容性好等优点，是极具潜力的人体硬组织修复材料。

发明内容

本发明的目的是提供一种负载细胞外全基质的壳聚糖/纳米羟基磷灰石缓释微球及其制备方法。

本发明所提供的制备负载细胞外全基质的壳聚糖/纳米羟基磷灰石缓释微球的方法，包括如下步骤：

1)将细胞外全基质溶液与壳聚糖溶液和纳米羟基磷灰石混合，得到细胞外全基质/壳聚糖/纳米羟基磷灰石溶液；

2)将液体石蜡、Span-80和所述细胞外全基质/壳聚糖/纳米羟基磷灰石溶液混合，乳化，得到乳化液；

3)将所述乳化液与异丙醇、戊二醛溶液混合，分散并交联固定，抽滤、高速离心、冷冻干燥后得到负载细胞外全基质的壳聚糖/纳米羟基磷灰石缓释微球。

上述方法中，步骤1)中，所述细胞外全基质溶液与壳聚糖和纳米羟基磷灰石的质量比为2：2：1。

上述方法中，所述细胞外全基质溶液中细胞外全基质的浓度为100g/L。

上述方法中，步骤2)中，液体石蜡和所述细胞外全基质/壳聚糖/纳米羟基磷灰石溶液的配比为200mL：20mL。

上述方法中，步骤2)中，所述乳化的时间为1.5h，乳化的温度为40℃。

上述方法中，步骤3)中，所述混合的方法为：向所述乳化液中加入20mL异丙醇分散10min，再逐滴加入0.5mL250g/L戊二醛溶液交联固定。

上述方法中，步骤3)中，所述交联固化的时间是4h。

上述方法中，所述纳米羟基磷灰石按照如下方法制备：将100mL0.1mol/LCa(NO₃)₂.4H₂O溶液加入到100mL0.06mol/L Na₂HPO₄溶液中，搅拌10min，调pH至7；将溶液放入微波炉中，在260W功率下反应10min，然后用去离子水洗涤，直至滤液pH值为7，取过滤后的产物，即为纳米羟基磷灰石。

由上述任一所述方法制备得到的负载细胞外全基质的壳聚糖/纳米羟基磷灰石微球也属于本发明的保护范围。

所述微球的粒径范围为3.52～29.65μm。

实验证明，利用本发明方法能够成功制备得到具有缓释效果的负载细胞外全基质的壳聚糖/纳米羟基磷灰石微球。该微球将壳聚糖作为细胞外全基质和纳米羟基磷灰石缓慢释放的载体，通过模拟细胞生长的天然微环境，更持久更全面的促进成骨细胞的成骨作用和血管内皮细胞的血管化，同时纳米羟基磷灰石也将缓慢释放，弥补了生物支架材料强度不足的弊端。负载细胞外全基质的壳聚糖/纳米羟基磷灰石缓释微球，能够持久缓慢的释放细胞外全基质和纳米羟基磷灰石，更贴近成骨细胞生长的微环境，增加了骨的强度，是很有潜力的骨组织工程材料。

具体实施方式

实施例1、缓释微球的制备及性能检测

一、制备

1、纳米羟基磷灰石的制备：将100mL0.1mol/L Ca(NO₃)₂.4H₂O溶液加入到100mL0.06mol/L Na₂HPO₄溶液中，搅拌10min，其pH＝7。将溶液放入微波炉中，在260W功率下反应10min，然后用去离子水洗涤，直至滤液pH值为7.0，将过滤后的产物在70℃下烘干后备用。