[发明专利]多糖-蛋白轭合物疫苗

权利要求书

1.制备轭合物疫苗的方法，该方法包括：

在pH约为6至约7，存在1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的条件下，将蛋白与1-氨基-2,3-丙二醇(APDO)反应，由此得到APDO修饰的蛋白溶液；

通过缓冲液更换将所述APDO修饰的蛋白溶液的pH调至约10.0到约11.0；

将所述APDO修饰的蛋白与氧化剂反应，由此得到醛活化的蛋白溶液；

通过缓冲液更换将所述醛活化的蛋白溶液的pH调至约10.0至约11.0；

在pH约6至约8的条件下，将酰肼活化的多糖与醛活化的蛋白反应，由此得到含有一或多个C=N双键的轭合物；及

将所述轭合物的基本全部C=N双键还原成C-N单键，由此得到能刺激免疫反应的轭合物疫苗。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述多糖选自脑膜炎球菌多糖，肺炎球菌多糖，b型嗜血流感杆菌多糖，伤寒杆菌Vi多糖，以及B型链球菌多糖。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述蛋白选自破伤风类毒素，白喉类毒素，CRM₁₉₇以及脑膜炎球菌蛋白。

4.如权利要求1所述的方法，其中通过以下步骤来制备酰肼活化的多糖：

在溶液中将多糖与氧化剂反应，由此得到醛活化的多糖；

将所述醛活化的多糖与己二酸二酰肼反应，得到含有一或多个C=N双键的中间体；以及

将所述中间体的基本全部C=N双键还原成C-N单键，由此得到酰肼活化的多糖。

5.如权利要求1所述的方法，其中通过以下步骤来制备酰肼活化的多糖：

将多糖与1-氰-4-二甲基铵吡啶四氟硼酸反应，由此得到氰酸盐活化的多糖；

将所述氰酸盐活化的多糖与己二酸二酰肼反应，由此得到酰肼活化的多糖。

6.如权利要求1所述的方法，其中通过以下步骤来制备酰肼活化的多糖：

在1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐存在的条件下，将多糖与己二酸二酰肼反应，由此得到酰肼活化的多糖。

7.轭合物疫苗，所述轭合物疫苗包括至少一种多糖部分和至少一种蛋白部分，其中所述多糖部分与所述蛋白部分通过至少一种式-C(=O)-NH-CH₂-CH₂-NH-NH-的连接基团相连接。

8.如权利要求7所述的轭合物疫苗，其中所述轭合物疫苗含有通过多个连接基团将多个多糖部分与多个蛋白部分交联形成的晶格结构。

9.如权利要求7所述的轭合物疫苗，其中所述多糖选自脑膜炎球菌多糖，肺炎球菌多糖，b型嗜血流感杆菌多糖，伤寒杆菌Vi多糖，以及B型链球菌多糖。

10.如权利要求7所述的轭合物疫苗，其中所述蛋白选自破伤风类毒素，白喉类毒素，CRM₁₉₇以及脑膜炎球菌蛋白。