[发明专利]一种肉鸡用新城疫水包油包水型灭活疫苗制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及疫苗技术领域，具体涉及一种肉鸡用新城疫水包油包水型灭活疫苗制备方法。

背景技术

鸡新城疫，又称“鸡瘟”，在家禽养殖中是一种重要的病毒性传染病，严重影响着养禽业的健康发展。目前我国肉鸡养殖出现规模化趋势，高密度大群饲养是目前发展的趋势，但针对肉鸡生长发育快、饲养周期短等现状，目前已存在的疫苗都不能很好的应对趋于复杂化的疾病；我国对新城疫的防制主要采用毒力不同的弱毒疫苗进行预防，而弱毒疫苗的缺点是对雏鸡仍有一定的致死率，能够增强对其它病原的易感性。

肉鸡生长周期短，快速的体重增加使肉鸡的免疫系统处于高负荷状态，这要求肉鸡用疫苗有更高的质量保证，适时适度的接种疫苗是有效避免疫情的措施。现有技术中，灭活疫苗多为油包水型，其制备工艺比较复杂，并且注射部位吸收较慢、抗原释放较慢，影响机体抵抗病毒的能力、后期影响禽类肉制品的品质；虽然能产生一定水平的抗体，但是抗体产生的时间较晚，不适于生长周期较短的肉鸡。

发明内容

为克服现有技术的技术缺陷，本发明提供一种肉鸡用新城疫水包油包水型灭活疫苗。

为了实现以上技术的技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种肉鸡用新城疫水包油包水型灭活疫苗制备方法，包括以下步骤：

1）油相的制备：取赛比克公司制造的MONTANIDE^TMISA206VG型佐剂，使用前进行充分混匀，并置于28-32℃水浴锅中预热至水浴锅温度，即为油相；

2）病毒液的制备：将鸡新城疫病毒毒种用灭菌生理盐水作3000-6000倍稀释，尿囊腔接种9-11日龄SPF鸡胚，每胚0.1ml，37℃孵育；

3）病毒的收获：选接种后48～120小时之间死亡且病痕明显的鸡胚，收获尿囊液，保存于-20℃；

4）病毒的灭活：向病毒液中加入37%(w/w)的福尔马林溶液，混匀，调整福尔马林终浓度至0.05-0.15%(w/w)，置于37℃转速为160-200转/分钟的摇床中灭活14-18小时；

5）病毒液的浓缩：将灭活后的鸡新城疫病毒液通过GQ管式离心机离心，弃去沉淀，将滤过液用Millipore公司制造的、截留分子量为200-500KD的膜包进行2倍浓缩，浓缩后的病毒液即为疫苗水相；

6）乳化：将步骤5）制备的疫苗水相置于28-32℃水浴锅中预热至水浴锅温度，再将其和油相按为1:0.8-1:1.2的比例（w/w）混合，用磁力搅拌装置进行搅拌，然后采用ATS Engineering Inc公司制造的AH100D型均质机对其进行乳化，共乳化1-3遍，即得到一种肉鸡用新城疫水包油包水型灭活疫苗。

上述制备方法中，步骤1）所述水浴锅温度优选为31℃；步骤2）所述稀释倍数优选为5000倍；骤4）所述病毒液中福尔马林终浓度优选为0.1(w/w)；步骤4）所述摇床转速优选为160转/分钟；步骤4）所述的灭火时间优选为16小时；步骤5）所述的膜包的截留分子量优选为300KD；步骤6）所述的水相与油相混合比例优选为1:1(w/w)；步骤6）所述的乳化次数优选为2次；步骤6）所述的乳化条件为调整所述均质机二级阀压力为20-30bar、一级阀压力200-400bar。

本发明的有益效果在于：本发明制备的疫苗为水包油包水型，粘度低，粒度小，易吸收，同时接种后产生抗体速度较快；本发明选用的佐剂在疫苗制备过程中无需要额外添加任何表面活性剂成分，制备的疫苗安全性好，避免了传统油佐剂难以吸收造成的副作用。

附图说明

图1是不同剂型的鸡新城疫疫苗免疫肉鸡后开始产生抗体时间规律

图2是不同剂型的鸡新城疫疫苗免疫肉鸡后产生抗体持续期规律

具体实施方式

实施例1

1.1油相的制备

取赛比克公司制造的MONTANIDE^TMISA206VG型佐剂，使用前进行充分混匀，并置于31℃水浴锅中预热至31℃，即为油相。

1.2病毒液的制备

将鸡新城疫病毒毒种用灭菌生理盐水作5000倍稀释，尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚，每胚0.1ml，37℃孵育；

1.3病毒的收获

选接种后48～120小时之间死亡且病痕明显的鸡胚，收获尿囊液，保存于-20℃；

1.4病毒的灭活

向病毒液中加入37%(w/w)的福尔马林溶液，混匀，调整福尔马林终浓度至0.1%(w/w)，置于37℃转速为180转/分钟的摇床中灭活16小时；