[发明专利]一种酶-高分子结合物及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种制备酶-高分子结合物的方法，包括如下步骤：

1）将高分子化合物和活化剂溶于有机溶剂中进行氧化反应后，加入沉淀剂进行沉淀，所得沉淀即为活化的高分子化合物；

2）将步骤1）所得活化的高分子化合物和酶于缓冲溶液中进行醛基与氨基的偶联反应0.5-4小时后，再加入还原剂进行碳-氮双键的还原反应10-20小时，得到所述酶-高分子结合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1）中，所述高分子化合物为嵌段结构为聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯的聚醚类嵌段共聚物；

所述高分子化合物的平均分子量为500-20000，具体为1100-12600；

所述高分子化合物具体选自和中的至少一种；

其中，所述的平均分子量为12,600；

所述的平均分子量为8,350；

所述的平均分子量为5,800；

所述的平均分子量为2,800；

所述的平均分子量为1,100；

所述活化剂为能将羟基氧化为醛基的试剂；具体选自铬类氧化剂和高价态碘化合物中的至少一种；

其中，所述铬类氧化剂具体选自重铬酸吡啶盐和氯铬酸吡啶盐中的至少一种；

所述高价态碘化合物具体选自戴斯-马丁氧化剂和2-碘酰基苯甲酸中的至少一种；

所述有机溶剂选自二氯甲烷、氯仿和甲苯中的至少一种；

所述沉淀剂选自乙醚、石油醚和正己烷中的至少一种；

所述步骤2）中，所述酶选自南极假丝酵母脂肪酶B、褶皱假丝酵母脂肪酶、米黑根毛霉脂肪酶、疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶、猪胰腺脂肪酶、胰凝乳蛋白酶、乙醇脱氢酶、细胞色素C、葡萄糖氧化酶、辣根过氧化物酶和漆酶中的至少一种；

所述南极假丝酵母脂肪酶B的酶活为5-15U/mg，具体为9U/mg；

所述褶皱假丝酵母脂肪酶的酶活为≥700U/mg，具体为700-1,000U/mg；

所述米黑根毛霉脂肪酶的酶活为≥20,000U/g，具体为20,000-25,000U/g；

所述疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶的酶活为≥100,000U/g，具体为100,000-180,000U/g；

所述猪胰腺脂肪酶的酶活为≥100,000U/g，具体为100,000-400,000U/g；

所述胰凝乳蛋白酶的酶活为≥40U/mg，具体为40-60U/mg；

所述乙醇脱氢酶的酶活为≥10.0U/mL，具体为10-16U/mL；

所述细胞色素C的酶活为8-20U/mg，具体为12U/mg；

所述葡萄糖氧化酶的酶活为100,000-250,000U/g，具体为150,000U/g；

所述辣根过氧化物酶的酶活为250-330U/mg，具体为300U/mg；

所述漆酶的酶活为≥0.5U/mg，具体为0.5-0.8U/mg；

所述缓冲溶液的pH值为7-10；具体选自下述化合物的水溶液中的至少一种：磷酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸钾、磷酸氢钾、磷酸二氢钠、硼酸、硼酸钠、硼酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾和碳酸氢钾；

所述缓冲溶液的浓度为5-100mM，具体为10-50mM；

所述还原剂为能将亚胺结构还原为胺的试剂；

所述还原剂具体选自硼氢化钠和氰基硼氢化钠中的至少一种。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述高分子化合物、活化剂、酶和还原剂的质量比为5-500：5-100：10：5-50，具体为10-350：5-60：10：10-40。

4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述步骤1）中，所述高分子化合物在有机溶剂中的质量百分浓度为1～5%。

5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：所述步骤1）中，反应温度为室温，时间为10-24小时；

所述步骤2）中，反应温度均为室温。

6.权利要求1-5任一所述方法制备得到的酶-高分子结合物。

7.根据权利要求6所述的酶-高分子结合物，其特征在于：所述酶-高分子结合物在有机溶剂中形成的颗粒粒径为10-200nm，具体为20-80nm。

8.根据权利要求7所述的酶-高分子结合物，其特征在于：所述有机溶剂选自甲苯、甲醇、氯仿和四氢呋喃的至少一种。

9.以权利要求6-8任一所述酶-高分子结合物为活性成分的催化剂。