[发明专利]一种生物标记物的保存液、试剂和方法

说明书

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂领域，尤其是一种生物标记物的保存液、试剂和方法。 

背景技术

蛋白质是一种具有复杂的空间立体结构的大分子物质，具有生物活性，易受外界条件的影响发生变性，在低浓度时（<0.1mg/mL）极易降解而失活，而且低浓度时易吸附于管壁造成损失。对于很多蛋白质，一般冻存于-20℃或-80℃，重复冷冻/融化循环可使蛋白变性，导致其形成活性降低的聚集物。 

荧光素经激发光照射后，吸收光能进入激发态，并能立即退激发并发出发射光（通常发射光的波长比入射光的波长长，即发生stock shift）。目前多用于细胞染色，以提高识别细胞的能力。常见的荧光素有小分子化合物如FITC、Cy5、Cy7、Alexa Fluor等，还有许多荧光蛋白如PE、APC、PerCP等。荧光素易淬灭，常于固体形态（多为小分子化合物的荧光素）、硫酸铵沉淀形式（如荧光蛋白）或于保存液中以高浓度低温避光保存，一般不可冷冻。 

将荧光素或荧光蛋白作为示踪物与单克隆抗体或多克隆抗体结合，形成荧光标记抗体，对相应抗原表达进行检测已成为一项重要的检测技术。 

荧光标记抗体应用主要有两个方面：一方面是荧光显微镜技术，其将荧光 标记抗体与细胞上的抗原结合后利用荧光显微镜观察抗体结合部位的荧光强弱从而判断结果。另一方面就是流式细胞分析技术，其用不同颜色的荧光素标记不同种类的单克隆抗体，可以在一个细胞上同时分析多种抗原分子，进一步增强了对细胞种类和功能等特性的认识，并且可以对大量细胞的荧光强度进行定量分析，其与计算机技术结合，提高了免疫荧光的检测水平并实现了细胞分析的自动化。不同的荧光标记抗体试剂可检测不同抗原，因此其已成为了流式细胞分析在科研或临床应用中的核心组成部分。 

随着技术的发展，荧光标记抗体也应用在生物芯片技术中。生物芯片（biochip）是指在固相基质上集成各种可以作为受体的生物信息，包括寡核苷酸、蛋白质/酶、抗原/抗体、细胞等，利用受体与连接物间的反应（包括核酸杂交反应、抗原/抗体亲和识别反应等）来进行生物学的检测。根据生物芯片固定的生物分子及材料不同可分为基因芯片、蛋白质芯片、芯片实验室、细胞芯片及组织芯片。蛋白质芯片是一种新型的生物芯片，是由固定于不同种类支持介质上的抗原或抗体微阵列组成，阵列中固定分子的位置及组成是已知的，用标记（荧光物质、酶或化学发光物质等标记）的抗体或抗原与芯片上的探针进行反应，然后通过特定的扫描装置进行检测，结果由计算机分析处理。 

蛋白质的分子光谱荧光分析法，具有灵敏度高、选择性好、动态响应范围宽以及测定条件更接近生命体的生理环境的优点而在蛋白质分析中应用广泛。荧光蛋白探针技术是利用物质的光物理和光化学特性，在分子量级上研究溶液中蛋白质高灵敏度的分析方法。 

随着技术的发展，用于示踪的荧光染料不限于荧光素和荧光蛋白，三价稀土离子及其螯合剂，或半导体纳米微晶粒这些受激发光激发后，发射光的波长 也会较激发光波长长，也具有荧光特性的物质也用作示踪物，标记在蛋白质、多肽、激素、核酸、活细胞等生物材料上。三价稀土离子及其螯合物具有更长的荧光衰变时间，更大的stock shift，用于时间分辨荧光免疫分析法(Time-Resolved Fluorescence Immunoassay，简称TRFIA)。TRFIA技术具有灵敏度高、特异性强、稳定性好，且测定范围更宽，操作简便和非放射性等特点，非常适用于生物学、医学上的超微量分析。半导体纳米微晶粒又称量子点（quantum dots，QDs），是一种直径在1～100nm之间，能够接收激发光产生荧光的半导体纳米颗粒。量子点与生物分子、活细胞等结合，为DNA检测(DNA芯片)、蛋白质检测(蛋白质芯片)和探索蛋白质-蛋白质之间(抗原-抗体、配体-受体、酶-底物)反应原理提供了先进的方法。 

由于原料价格高和生产工艺的复杂性等原因，结合荧光示踪物的生物标记物，特别是荧光标记蛋白试剂普遍成本较高。同时，因其敏感性和特异性高，一般试剂使用量少，且浓度低。该类试剂需要低温保存，对运输和存储的条件要求偏高，从而也增加了试剂成本。这些特点影响了荧光标记蛋白试剂的商业化应用。因此，有效保持荧光标记蛋白试剂中蛋白生物活性、荧光稳定性、荧光示踪物-蛋白缀合物稳定性，方便试剂使用及有效降低试剂成本的保存方法成为体外诊断试剂领域重要课题。 

现有的技术中，用于保持蛋白质稳定性和活性的保存液很多，但均没有提到对荧光稳定性和荧光标记蛋白稳定性的保持。