[发明专利]用于与KRAS基因杂交的DNA探针库及采用其富集KRAS基因片段的方法

权利要求书

1.一种用于与KRAS基因杂交的DNA探针库，其特征在于，所述DNA探针库包括一个或多个能够与KRAS基因杂交的DNA探针，所述DNA探针包含以下序列：

SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、或SEQ IDNO.10；

优选地，所述DNA探针的序列如以下序列所示：

SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、或SEQ ID NO.10。

2.一种富集KRAS基因片段的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1）获得受试者的DNA样本库；

2）获得能够与KRAS基因杂交的DNA探针库；

3）使所述DNA探针库与所述DNA样本库进行杂交；和

4）分离步骤3）的杂交产物，然后释放经杂交富集的KRAS基因片段。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步骤1）中的DNA样本库由双链DNA片段组成，并且，所述步骤1）包括：

1-1）提取受试者的全基因组DNA，然后将其片段化；或者

1-2）提取受试者的mRNA，将其片段化，然后以该经片段化的mRNA为模板合成双链cDNA；

其中，所述受试者为哺乳动物，优选人，且从受试者的细胞、组织或体液样本中提取全基因组DNA或mRNA；

优选地，所述DNA片段的长度为150-600bp；

进一步优选地，所述DNA片段的长度为150-200bp。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤2）中的DNA探针库为根据权利要求1所述的DNA探针库。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤3）包括：

3-1）采用选择性标记标记DNA探针库中的DNA探针；和

3-2）使所述DNA探针库与DNA样本库进行杂交；

优选地，所述步骤3-1）中的选择性标记为生物素；

进一步优选地，所述步骤3-2）包括在PCR扩增仪中，在65℃下将所述DNA探针库与DNA样本库孵育24小时。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤4）中利用DNA探针上的选择性标记分离杂交产物；

优选地，所述步骤3-1）中的选择性标记为生物素，所述步骤4）中利用链霉亲和素-生物素的亲和作用分离杂交产物。

7.一种检测KRAS基因的基因结构突变的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1）根据权利要求1至6中任一项所述的方法富集KRAS基因片段；和

2）检测所述KRAS基因的基因结构突变。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤2）中采用下一代测序技术，通过对富集到的KRAS基因片段进行测序而检测所述KRAS基因的结构突变。

9.一种用于富集KRAS基因片段的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含根据权利要求1所述的DNA探针库。