[发明专利]一种从红凤菜新鲜茎叶中提取分离总黄酮的方法

权利要求书

1.一种红凤菜总黄酮的提取分离方法，以红凤菜的新鲜茎叶为原料，乙醇提取，经过2次柱层析，获得红凤菜总黄酮。

2.根据权利要求1所述的红凤菜总黄酮的提取分离方法，所述的2次柱层析依次为大孔树脂柱层析和聚酰胺柱层析。

3.根据权利要求1所述的红凤菜总黄酮的提取分离方法，其特征包括以下步骤：

(1)提取：以红凤菜的新鲜茎叶为原料，用乙醇冷浸提取2-3次，合并滤液，减压浓缩至原体积的1/3-1/5，得到浓缩液；

(2)冷沉：将步骤(1)得到的浓缩液在冰箱中放置3-5天冷沉，取上清液；

(3)大孔树脂柱层析：将步骤(2)得到上清液用大孔树脂进行柱层析，水-乙醇梯度洗脱，收集洗脱液，浓缩除去乙醇，得到浓缩液；

(4)聚酰胺柱层析：将步骤(3)得到的浓缩液用聚酰胺柱层析，水-乙醇梯度洗脱，收集洗脱液，浓缩到小体积，放置，忻出结晶；

(5)过滤、干燥：将步骤(4)析出的结晶滤出，母液合并，结晶与母液分别干燥，得到不同纯度的红凤菜总黄酮提取物，用高效液相(HPLC)方法检测，其中结晶部分总黄酮含量达90％以上，母液部分总黄酮含量达80％以上。

4.根据权利要求3所述的红凤菜总黄酮的提取分离方法，其特征为步骤(1)用乙醇提取，所用乙醇的体积分数为70％-95％，料液比(W：V)为1：3-5。

5.根据权利要求3所述的红凤菜总黄酮的提取分离方法，其特征为步骤(3)大孔树脂柱层析所用的大孔树脂为NKA、AB-8、HPD-100、X-5、D101中的一种，上样量为50-100g/L柱床体积，样品浓度为0.02-0.05g/ml，水-乙醇梯度洗脱所用的乙醇体积分数依次为0，30％，50％，70％，95％，洗脱体积均为2倍柱床体积。

6.根据权利要求3所述的红凤菜总黄酮的提取分离方法，其特征为步骤(3)大孔树脂柱层析所收集的洗脱液为50％乙醇洗脱部分。

7.根据权利要求3所述的红凤菜总黄酮的提取分离方法，其特征在于步骤(4)聚酰胺柱层析所用的聚酰胺为60-100目粉末，上样量为5-10g/L柱床体积，样品浓度为0.002-0.005g/ml，水-乙醇梯度洗脱所用的乙醇体积分数依次为0，30％，50％，70％，95％，洗脱体积均为2倍柱床体积。

8.根据权利要求3所述的红凤菜总黄酮的提取分离方法，其特征在于步骤(4)聚酰胺柱层析，收集洗脱液为收集30-50％乙醇洗脱部分，收集的每份体积为1/10柱床体积。