[发明专利]一种黄姜皂素清洁生产方法

权利要求书

1.一种黄姜皂素清洁生产方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）将黄姜粉碎，然后过滤获得纤维渣和滤出物；将滤出物静置分为三层，上层为上清液，中层为悬浊液，下层为淀粉；倒出上清液备用；分离出下层淀粉并洗涤，将淀粉洗涤后的洗液并入悬浊液中得到悬浮液；

2）将悬浮液离心后得到悬浮液沉淀和悬浮液清液，将悬浮液清液用截留分子量为700Dalton的纳滤膜进行膜分离得到含薯蓣皂苷的保留液；将保留液与悬浮液沉淀混合，并调整得到固形物含量为4-6%的混合液，按比例在每100ml混合液中加入6-8ml蒺藜提取液、0.2-0.3g乙酸钠、0.3-0.5g柠檬酸氢二铵和0.008-0.012ml吐温80及0.4-0.6g酪蛋白水解物得到发酵培养基，将发酵培养基的pH值调至5.0-6.0，灭菌冷却后按发酵培养基体积的5-8%接种量接入嗜酸乳杆菌，在34-38℃下发酵培养2-3d进行生物转化将薯蓣皂苷为皂素；

3）将发酵结束后得到的发酵液的pH值调至6.5-7.5，然后离心分离得到发酵液清液和发酵液沉淀；将发酵液沉淀在50-60℃烘干，加入乙醇进行提取皂素后抽滤得到抽滤液和残渣；

4）用石油醚反复萃取抽滤液，静置分层，合并石油醚层，再浓缩结晶后得到黄姜皂素。

2.根据权利要求1所述的一种黄姜皂素清洁生产方法，其特征在于，步骤1）中采用80-100目的滤布进行过滤，滤出物静置5-6h后分成三层。

3.根据权利要求1所述的一种黄姜皂素清洁生产方法，其特征在于，步骤2）中悬浮液离心时的转速为3000-4000r/min，离心时间为10-15min；灭菌时的温度为121℃，灭菌时间20-30min。

4.根据权利要求1所述的一种黄姜皂素清洁生产方法，其特征在于，步骤3）中发酵结束后用0.75-1.25mol/L的NaOH溶液调节发酵液的pH值。

5.根据权利要求1所述的一种黄姜皂素清洁生产方法，其特征在于，步骤3）中发酵液离心分离时的转速为5000-7000r/min，离心时间为10-15min。

6.根据权利要求1所述的一种黄姜皂素清洁生产方法，其特征在于，步骤3）中对发酵液沉淀提取时，加入沉淀量2-4倍的乙醇提取3-4h完成皂素提取。

7.根据权利要求1所述的一种黄姜皂素清洁生产方法，其特征在于，步骤3）中将发酵液清液经截留分子量为700Dalton的纳滤膜进行膜分离得到含未转化的薯蓣皂苷的保留液，回收保留液用于下一次黄姜皂素生产时，步骤2）中的生物转化。

8.根据权利要求1所述的一种黄姜皂素清洁生产方法，其特征在于，步骤4）中用抽滤液体积1/3-1/2的石油醚反复萃取抽滤液至少3次。

9.根据权利要求1所述的一种黄姜皂素清洁生产方法，其特征在于，还包括对将步骤1）中得到的纤维渣和洗涤后的黄姜淀粉的加工处理，处理包括如下步骤：

a.在纤维渣中加入质量分数分别为15-25%的麦麸、0.5-1.5%的硫酸铵和体积质量分数为0.08-0.12%的吐温80，并搅拌均匀，然后灭菌冷却到30-40℃再按体积质量分数为8-12%的接种量接入绿色木霉，恒温培养后，得到含纤维素酶和菌体蛋白的黄姜纤维渣；

b.将黄姜淀粉用步骤1）中得到的上清液进行调浆，经液化、糖化获得黄姜淀粉的酶解液，将酶解液降温后，按比例在每升酶解液中加入8-12g的(NH₄)₂SO₄、3-7g的蛋白胨、2.0-4.0g的无水乙酸钠、4-8g的柠檬酸氢二铵、0.8-1.2mL的吐温80、0.2-0.4g的硫酸镁、0.05-0.08g的硫酸锰和3.0-5.0g的磷酸氢二钾，搅拌均匀并调节pH值至5.5-6.5后得到酶解培养液，灭菌冷却后按比例在每100ml酶解培养液中接入3-5ml保拉迪酵母和5-7ml嗜酸乳杆菌，发酵后通过固液分离得到益生菌菌泥；

c.将益生菌菌泥添加到含纤维素酶和菌体蛋白的黄姜纤维渣中，混合均匀并低温烘干后得到黄姜活性饲料。

10.根据权利要求9所述的一种黄姜皂素清洁生产方法，其特征在于，步骤a中灭菌时的温度为121℃，灭菌时间20-30min；恒温培养时的温度为27-33℃，时间为3-5d；步骤b中灭菌时的温度为121℃，灭菌时间20-25min；发酵时的温度为33-39℃，发酵时间为48-60h。