[发明专利]一种酸性蛋白酶盐析效果的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种酸性蛋白酶盐析效果的检测方法。

背景技术

目前国内酶制剂产品有固体剂型和液体剂型，其中，固体剂型生产工艺用盐析法把酶从液体中取出，盐析用原料有硫酸钠和硫酸铵，不同酶制剂品种添加的硫酸钠比例也不一样，为达到最佳效果，一般酶制剂都是通过检测酶发酵液盐析过滤后的滤液中该酶的含量确定盐析效果，通过研究发现，由于酸性蛋白酶的特殊性，酸性蛋白酶盐析后检测效果时无法测出滤液中酸性蛋白酶的真实活力，这样就会因酸性蛋白酶发酵液中的泡沫、盐析剂的质量等原因影响酸性蛋白酶的盐析效果时无法检测出来，从而导致生产中影响到酸性蛋白酶收率，造成收率低和不稳定。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种能使酸性蛋白酶收率稳定且收率高的酸性蛋白酶盐析效果检测方法。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案为:一种酸性蛋白酶盐析效果的检测方法，利用酸性蛋白酶发酵液中含有的糖化酶活性，通过测定盐析液中糖化酶的含量来确定酸性蛋白酶的盐析效果，当糖化酶的含量≤3u/mL（1g固体酶粉（或1mL液体酶），于40℃、pH=4.6条件，1h分解可溶性淀粉产生1mg葡萄糖，即为1个酶活力单位，以u/mL表示）时，酸性蛋白酶析出率＞99.9%（效果最佳）。

本发明所要解决的第二个技术问题是，提供一种酸性蛋白酶盐析方法。

为解决第二个技术问题，本发明采用的技术方案是：酸性蛋白酶盐析方法，其具体步骤为：

1）酸性蛋白酶发酵液中加入盐析剂，搅拌溶解，沉淀8±0.5小时；

2）将沉淀后的酸性蛋白酶盐析液过滤；

3）检测步骤2）所得滤液中的糖化酶的含量，当糖化酶的含量≤3u/mL，酸性蛋白酶析出率＞99.9%（效果最佳）。

所述的滤液中糖化酶的含量，采用QB/T1803-1993中糖化酶测定方法检测。

所述的盐析剂为硫酸钠或硫酸铵。

本发明的有益效果：本发明通过检测滤液中含有的糖化酶含量，确定酸性蛋白酶盐析有没有达到要求的效果，通过本发明公开的技术方案，使得盐析效果能够达到最佳，保证了酸性蛋白酶的高收率及稳定性；同时，由于盐析效果的检测方法明确后，避免了盐析时过量加入盐析剂，从而节省了盐析原料，降低了生产成本。

具体实施方式

下面结合具体实施例详细描述一下本发明的具体内容。

实施例1

取发酵活力为7100u/mL的酸性蛋白酶发酵液，分别做盐析比例（体积重量比）为30%、32%、33%、34%、35%盐析试验，其中35%为规定的最佳盐析比例，分别加入盐析剂充分溶解后沉淀8小时，用滤纸进行过滤，滤液分别测酸性酸性蛋白酶活力和糖化酶活力，结果如下：

表一：（酶活力单位：u/mL）