[发明专利]新城疫病毒和鸭圆环病毒融合蛋白及其编码基因与应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种新城疫病毒和鸭圆环病毒融合蛋白及其编码基因与应用，特别涉及一种由鸭源新城疫病毒F蛋白和鸭圆环病毒Cap蛋白形成的融合蛋白及其编码基因与应用。 

背景技术

鸭源新城疫是由新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）引起鸭的一类急性、高度接触性和致死性的传染病。早期国内外有关研究表明禽NDV从不感染水禽，强毒感染也不表现明显的临床症状。但近年来发现引起高致病性和死亡性的鸭源NDV的自然流行，不仅给养鸭业造成较大的损失，同时也对我国养鸡业造成威胁。新城疫病毒的F蛋白是病毒致病的分子基础，参与病毒囊膜与细胞的融合致病过程，还具有良好的免疫原性，是NDV主要的保护性抗原。 

鸭圆环病（Duck circovirus Disease）是由鸭圆环病毒（Duck circovirus，DuCV）引起的一种主要侵害免疫系统，致免疫功能的下降或免疫抑制的疾病。DuCV基因组中主要编码三个蛋白：Rep、Cap和C3，其中Cap蛋白可能是DuCV的核衣壳的组成部分，与其致性及保护性抗原相关。 

DNA疫苗作为一种新型的基因工程疫苗，具有低成本、免疫期长、生产速度快、热稳定性好、便于保存和运输等优点，倍受生物界的广泛重视，目前已经在诸多领域被进行广泛而深入的研究，并已取得丰硕的成果。针对艾滋病、流感、T淋巴细胞瘤和H型单纯孢疹病毒的DNA疫苗已进入临床试验阶段，丙型肝炎、结核病及狂犬病等的核酸疫苗正处于研发之中并取得一定进展。 

目前在国内外研究于禽类的DNA疫苗主要针对同一病源，如禽流感病毒、鸡马立克氏病病毒、新城疫病毒等。但针对两种病毒的融合表达的DNA疫苗国内外均未见报道。 

发明内容

本发明的目的是提供一种新城疫病毒和鸭圆环病毒融合蛋白及其编码基因与应用。 

本发明所提供的融合蛋白自氨基端至羧基端依次含有鸭源新城疫病毒的F蛋白和鸭圆环病毒的Cap蛋白。 

进一步，所述鸭源新城疫病毒的F蛋白的氨基酸序列为序列表中序列1的第1-553位；所述鸭圆环病毒的Cap蛋白的氨基酸序列为序列表中序列1的第574-829位。 

更加具体的，所述融合蛋白是如下（a）或（b）： 

（a）由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白； 

（b）将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列1衍生的蛋白。 

其中，序列1由829个氨基酸组成，第1-553位为所述鸭源新城疫病毒的F蛋白，第574-829位为所述鸭圆环病毒的Cap蛋白，第554-573位为Linker接头。 

上述（a）和（b）中的所述融合蛋白均可人工合成，也均可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。上述（b）中的蛋白质的编码基因可通过将序列表中序列2所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变。 

编码所述融合蛋白的基因也属于本发明的保护范围。 

进一步，所述基因为如下1）-3）中任一： 

1）序列表中序列2所示的DNA分子； 

2）与1）限定的DNA分子具有90％以上同源性，且编码所述融合蛋的DNA分子； 

3）在严格条件下与1）或2）限定的DNA分子杂交，且编码所述融合蛋的DNA分子。 

上述严格条件可为用6×SSC，0.5%SDS的溶液，在65oC下杂交，然后用2×SSC，0.1%SDS和1×SSC，0.1%SDS各洗膜一次。 

其中，序列2由2496个核苷酸组成，编码序列表中序列1所示融合蛋白。 

含有所述基因的重组载体、表达盒、重组细胞或重组菌也属于本发明的保护范围。 

所述重组载体可为重组表达载体，也可为重组克隆载体。 

在本发明的一个实施例中，在所述重组表达载体中，启动所述基因转录的启动子为CMV启动子。更为具体的，所述重组表达载体为在pcDNA3.1(+)载体的多克隆位点处插入所述基因后得到的重组质粒（pcDNA3.1-F-Cap）。所述多克隆位点具体为HindIII和EcoR I。 

所述表达盒由能够启动所述基因表达的启动子，所述基因，以及转录终止序列组成。