[发明专利]无需PCR仪的侧翼核酸序列快速准确扩增方法及应用有效
| 申请号： | 201310412687.5 | 申请日： | 2013-09-11 |
| 公开（公告）号： | CN103421777A | 公开（公告）日： | 2013-12-04 |
| 发明（设计）人： | 胡广隆;程丽莉;黄武刚 | 申请（专利权）人： | 北京市农林科学院林业果树研究所 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 100093 北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 无需 pcr 侧翼 核酸 序列 快速 准确 扩增 方法 应用 | ||
1.用于无需PCR仪的侧翼核酸序列快速准确扩增方法的引物，其为：
RPA-nest1c：tcacagaagtatgccaagcgaggiiiiicggtc（如SEQ ID No.1所示）；
RPA-nest1a：tcacagaagtatgccaagcgaggiiiiiaggtc（如SEQ ID No.2所示）；
RPA-nest1t：tcacagaagtatgccaagcgaggiiiiitggtc（如SEQ ID No.3所示）；
RPA-nest1g：tcacagaagtatgccaagcgaggiiiiigggtc（如SEQ ID No.4所示）；
RPA-nest2：tcacagaagtatgccaagcg（如SEQ ID No.5所示）；
RPA-nest3：cagaagtatgccaagcgagg（如SEQ ID No.6所示）。
2.一种无需PCR仪的侧翼核酸序列快速准确扩增方法，其特征在于，包括如下步骤：
1）第一轮反应
以DNA模板、重组酶聚合酶、第一轮引物进行第一轮反应；
所述的第一轮引物为RPA-nest1c（如SEQ ID No.1所示）、RPA-nest1a（如SEQ ID No.2所示）、RPA-nest1t（如SEQ ID No.3所示）和RPA-nest1g（如SEQ ID No.4所示）；
2）第二轮反应
以第一轮反应产物为模板，加入重组酶聚合酶、第二轮引物，进行第二轮反应；
所述的第二轮引物为RPA-nest2（如SEQ ID No.5所示）；
3）第三轮反应
以第二轮反应产物为模板，加入重组酶聚合酶、第三轮引物进行第三轮反应；
所述的第三轮引物为RPA-nest3（如SEQ ID No.6所示）。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述重组酶聚合酶为英国TwistDX公司的重组酶聚合酶。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述重组酶聚合酶为TwistDX重组酶聚合酶冷冻干粉。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，反应体系具体如下：
第一轮反应体系：
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，反应条件为每轮反应37-39℃加热15-40分钟。
7.用于无需PCR仪的侧翼核酸序列快速准确扩增方法的试剂盒，包括下列组分：
8.权利要求2-6任一项所述的方法在DNA序列扩增中的应用。
9.权利要求1所述的引物在DNA序列扩增中的应用。
10.权利要求7所述的试剂盒在DNA序列扩增中的应用。
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