[发明专利]一种沉默人c2orf68基因的shRNA及其医药用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体为一种能降低c2orf68基因表达的shRNA序列；以及利用该shRNA序列对c2orf68基因特异性干扰后抑制结直肠癌细胞增殖和凋亡。 

背景技术

结直肠癌是人类较为常见的恶性肿瘤之一，其发生、发展是一个多基因改变，多阶段致癌的复杂过程，包括癌基因的激活、抑癌基因的失活或缺失、错配修复基因的突变等。最近几年调查显示，结直肠癌的发病居消化道恶性肿瘤的第二位，在我国发病率较高，而且呈现逐年增高的趋势。因此，研究结直肠癌发病相关的基因，可以为结直肠癌的分子诊断、治疗及预后提供潜在有效靶标。 

RNA干扰（RNA interference, RNAi）是指双链RNA（double-strand RNA,dsRNA）在细胞内特异性地诱导与之同源互补的mRNA的降解，使相应的基因的表达关闭，从而引发基因转录后水平的沉默现象。RNAi技术具有高度的特异性、沉默效率高、转化效率高等优点，该技术广泛应用于功能基因组的研究领域。利用短发卡shRNA来抑制特定基因的表达，由此可以用于制备治疗结直肠癌的药物。 

发明内容

本发明的目的是提供一种新型的短发夹shRNA，并证明所述shRNA片段可在制备治疗结直肠癌的药物中应用。 

人c2orf68基因已在GenBank注册，注册号NM_001013649.3，定位于2p11.2，全长4283bp，编码166个氨基酸，其核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO：1所述。人c2orf68基因的组织表达谱分析显示：该基因在结直肠癌等胃肠肿瘤中均有表达。 

本发明所述在人结直肠癌细胞中特异表达的RNA干扰靶点来源于序列表中SEQ ID NO：1所述的人c2orf68基因，是SEQ ID NO：1中第460位至478位核苷酸序列组成的基因片段，其核苷酸序列见序列表中SEQ ID NO：3。 

本发明所述在人结直肠癌细胞中特异表达的RNA干扰靶点的短发夹shRNA由人工设计合成，其核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO：2所述。 

实验表明，将所述shRNA转染入人直肠癌细胞，shRNA片段作用于人c2orf68基因中的RNA干扰靶点可导致结直肠癌细胞的凋亡并抑制结直肠癌细胞的增殖，因此，本发明所述短发夹shRNA在制备治疗结直肠癌的药物中的应用。 

附图说明

图1为荧光定量PCR实验中人c2orf68基因引物的标准曲线图。 

图2为荧光定量PCR实验中人内参gapdh基因引物的标准曲线图。 

图3为转染人结直肠癌细胞株SW480^-siRNA（转染干扰shRNA片段的人结直肠癌细胞株SW480）、SW480^-NC （转染阴性shRNA片段的人结直肠癌细胞株SW480）、空白对照组SW480（未转染shRNA片段的人结直肠癌细胞株SW480）的c2orf68基因表达的柱状图。 

图4为转染人结直肠癌细胞株SW620^-siRNA（转染干扰shRNA片段的人结直肠癌细胞株SW620）、SW620^-NC （转染阴性shRNA片段的人结直肠癌细胞株SW620）、空白对照组SW620（未转染shRNA片段的人结直肠癌细胞株SW620）的c2orf68基因表达的柱状图。 

图5为转染人结直肠癌细胞株LS174T^-siRNA（转染干扰shRNA片段的人结直肠癌细胞株LS174T）、LS174T^-NC（转染阴性shRNA片段的人结直肠癌细胞株LS174T）、空白对照组LS174T（未转染shRNA片段的人结直肠癌细胞株LS174T）的c2orf68基因表达的柱状图。 

图6为流式细胞仪检测转染人结直肠癌细胞株LS174T^-siRNA（转染干扰shRNA片段的人结直肠癌细胞株LS174T）、LS174T^-NC （转染阴性shRNA片段的人结直肠癌细胞株LS174T）、空白对照组LS174T（未转染shRNA片段的人结直肠癌细胞株LS174T）的c2orf68凋亡图。